慢痞消颗粒对咽峡炎链球菌条件培养上清诱导GES-1细胞损伤的干预作用及潜在机制OA

目的观察慢痞消颗粒对咽峡炎链球菌条件培养上清诱导GES-1细胞损伤的干预作用,并探讨其潜在机制。方法制备咽峡炎链球菌裂解液和条件培养上清,采用CCK-8法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术筛选损伤模型。细胞实验分为正常组、模型组和慢痞消颗粒组,模型组采用6.25%咽峡炎链球菌条件培养上清处理24小时,慢痞消颗粒组建模后给予10%慢痞消颗粒含药血清干预24小时,观察细胞死亡状态、转录组表达谱及关键差异基因表达。细菌实验采用无菌PBS配制并经0.22μm滤膜过滤除菌的0.5、1.0、2.0 mg/mL慢痞消颗粒药液处理,观察细胞毒性、红细胞溶血、菌体存活状态、菌体形态及成熟生物膜结构。结果(1)咽峡炎链球菌条件培养上清较裂解液可更稳定地诱导GES-1细胞损伤;模型组Annexin V/PI双阳性细胞比例较正常组升高(P<0.01),慢痞消颗粒组较模型组降低(P<0.01)。(2)与正常组比较,模型组B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X protein,BAX)和凋亡相关因子的mRNA表达升高(P<0.01);与模型组比较,慢痞消颗粒组BAX和B淋巴细胞瘤-2的mRNA表达降低(P<0.01)。(3)慢痞消颗粒干预相关差异基因主要涉及细胞外基质、黏附连接、整合素信号及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路等过程;实时荧光定量PCR显示,慢痞消颗粒可调节血红素氧合酶1、白细胞介素24、前列腺素E合酶和溶质载体家族7成员11表达。(4)0.5~2.0 mg/mL慢痞消颗粒药液未见明显溶血作用或细胞毒性;慢痞消颗粒处理后,咽峡炎链球菌死亡或膜受损相关荧光信号增加,菌体聚集减少,成熟生物膜OD570值降低(P<0.01)。结论慢痞消颗粒可减轻咽峡炎链球菌条件培养上清诱导的GES-1细胞损伤,其作用可能与调节炎症、氧化应激及细胞外基质—黏附连接—整合素/PI3K-Akt相关网络有关,同时可影响咽峡炎链球菌膜完整性、菌体聚集及成熟生物膜结构。