CLTC通过激活ERK信号通路促进口腔鳞状细胞癌的侵袭与转移OA

目的口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)早期症状隐匿,多数患者确诊时已伴淋巴结转移,预后差且生存率低,亟需探索新的早期诊断标志物与靶向治疗策略。网格蛋白重链(clathrin heavy chain,CLTC)是细胞内吞过程的关键调控蛋白,但其在OSCC中的表达水平、临床意义及对侵袭、迁移的作用与机制尚待阐明,揭示这些环节可为OSCC靶向治疗提供新靶点。方法整合TCGA和GEO数据库的OSCC患者转录数据与对应临床信息,分析CLTC在OSCC患者中的表达水平。采用Kaplan-Meier生存分析评估CLTC表达对OSCC患者预后的影响。整合CLTC表达水平及患者年龄、肿瘤分期、肿瘤大小、淋巴结转移状态等临床病理参数,构建Nomogram预后预测模型个体化评估OSCC患者的预后。基于KEGG数据库,采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探究与CLTC相关的信号通路。利用免疫组化和Western blotting检测CLTC蛋白表达水平,并分析其与患者临床病理特征间的关系。利用Western blotting和RT-qPCR检测CLTC在HOK、HGE、HSC3、SCC9、CAL27及SCC25细胞系中的表达。针对CLTC基因序列设计3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用Western blotting和RT-qPCR验证转染效率。利用划痕愈合实验、Transwell实验分别评估OSCC细胞的迁移与侵袭能力。利用Western blotting实验检测ERK信号通路相关蛋白(ERK、pERK)的表达。结果生物信息学分析显示,CLTC在口腔癌、肝细胞癌、肺腺癌等多种癌种中均呈显著高表达,且高表达与患者不良预后显著相关(P=0.033,HR=1.45,95%CI:1.03~2.03)。TCGA队列Nomogram预测模型显示,1、3、5年生存预测AUC值分别为0.660、0.753和0.793,校准曲线提示模型预测生存概率与实际生存概率一致性良好;GEO队列Nomogram预测模型显示,1、3、5年生存预测AUC值分别为0.722、0.762和0.760,校准曲线同样显示较好的一致性。GSEA分析结果显示,CLTC差异基因集显著富集于多条肿瘤相关KEGG通路。其中,癌症通路、Wnt、TGF-β及MAPK通路富集效应显著,富集结果具备较高统计学可信度。临床样本检测显示,CLTC在OSCC组织中的表达水平显著高于配对的癌旁组织(P<0.001),且其表达水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况均显著相关(P<0.05)。敲低CLTC后,实验组SCC25细胞的侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.001)、ERK信号通路相关蛋白的表达水平也显著下调(P<0.001)。回复实验结果显示,加入ERK信号通路激活剂LM22B-10后,细胞侵袭与迁移能力的下降均得到部分恢复(P<0.01)。结论CLTC在OSCC组织和细胞中异常高表达,其表达水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况显著相关。CLTC可调控OSCC细胞侵袭与迁移能力,此作用可能与抑制ERK信号通路的活化相关。