非洲猪瘟病毒p49蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立OA

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p49抗体的血清学检测方法。通过构建pCold I-p49重组质粒,以纯化的p49蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果:获得的重组p49蛋白可以与His标签抗体和ASFV标准阳性血清发生反应,ELISA方法的抗原包被浓度为0.8μg/mL,封闭液为5%脱脂乳,待检血清以1∶400稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶20000,37℃孵育1 h,四甲基联苯胺(TMB)显色15 min;该方法的阳性临界值为0.189(≥0.189为阳性,<0.189为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,最低检测稀释度为1∶3200,批内变异系数在1.53%~5.91%之间,批间变异系数在3.46%~5.73%之间,与商品化试剂盒符合率为92.39%(85/92)。本研究成功建立ASFV p49蛋白间接ELISA抗体检测方法,为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。