基于质谱的自上而下完整蛋白质分析OA

解析蛋白质及其变体结构是阐明其生物学功能与分子调控机制的核心前提。质谱技术凭借其高灵敏度、高准确度及高通量优势,能实现对蛋白质的大规模精准鉴定。基于质谱的自上而下蛋白质组学以完整蛋白质作为分析对象,规避了传统自下而上蛋白质组学酶解步骤导致的肽段信息被割裂等问题,从而能够在蛋白质变体水平上保留多种结构变异和修饰之间的组合关系,弥补自下而上蛋白质组学在完整蛋白质变体解析方面的不足。本文系统总结了自上而下蛋白质组学的完整分析流程,涵盖样品制备、电离技术、串联质谱和数据处理等主要环节,并重点讨论了串联质谱解离技术。不同解离/离子活化方式,如ECD/ETD、AI-ETD和UVPD等,具有不同的碎裂机制和碎片离子类型,互补使用有助于提高蛋白质序列覆盖度、翻译后修饰定位可信度和复杂蛋白质变体的表征深度。基于上述技术进展,自上而下蛋白质组学在解析疾病相关蛋白质变体、揭示病理机制以及发现新型体液诊断标志物方面展现出了独特优势,本文也对其在肿瘤标志物、神经退行性疾病及临床诊断中的应用进行了整理介绍。