piRNA-13663072通过调控Bcl-2/Bax-Caspase-3通路抑制同型半胱氨酸诱导的足细胞凋亡OA

目的探讨piRNA-13663072通过调控Bcl-2/Bax-Caspase-3通路抑制同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肾足细胞(MPC-5)凋亡。方法通过Cbs+/-小鼠建立高Hcy血症(HHcy)肾损伤模型,利用RNA-seq筛选肾脏组织中差异表达的piRNAs;以Hcy(80μmol/L)体外干预MPC-5细胞构建足细胞损伤模型,采用qRT-PCR验证piR-13663072的表达并进行物种保守性分析。通过转染piR-13663072 mimic、构建过表达细胞模型,转染piR-13663072 inhibitor构建沉默细胞模型,采用Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Bcl-2)的表达变化,PI染色检测细胞凋亡数,鬼笔环肽染色观察细胞骨架形态。结果Hcy干预可显著诱导MPC-5细胞发生凋亡(促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低)与骨架损伤。RNA-seq及q RT-PCR验证显示,piR-13663072在HHcy肾损伤的小鼠肾脏和MPC-5细胞中均显著下调,且该piRNA在哺乳动物中呈中等保守。转染piR-13663072 mimic后,piR-13663072水平显著升高,且能够抑制Bax和Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达,同时有效减少Hcy诱导的PI阳性细胞数量,改善细胞骨架损伤。与之相反,转染piR-13663072 inhibitor后,piR-13663072水平显著降低,可促进Bax和Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达,进一步增加了Hcy诱导的PI阳性细胞数量,加重细胞骨架损伤。结论piR-13663072在Hcy诱导的足细胞损伤中表达下调,过表达piR-13663072可通过调控Bcl-2/BaxCaspase-3通路,有效抑制足细胞凋亡并减轻骨架损伤,发挥足细胞保护作用,而沉默piR-13663072则会加剧上述损伤,该分子有望成为HHcy肾损伤的潜在生物标志物及治疗靶点。