基于Nrf2/NF-κB通路探讨绿原酸对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护机制OA

目的 探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)调节氧化应激与抑制炎症从而改善四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤(acute liver injury,ALI)的作用机制.方法 32 只雄性昆明小鼠,随机分为正常对照组(Control)、CGA 组(CGA)、模型组(CCl4)、CGA 干预组(CCl4+CGA),每组8 只.小鼠适应性饲养 1w 后,CGA 组和 CCl4+CGA 组腹腔注射 CGA(200 mg/kg),1 次/d,连续14 d,Control 组和 CCl4 组小鼠腹腔注射等体积生理盐水.在末次给药 2h 后,CCl4 组和 CCl4+CGA 组均腹腔注射50%CCl4 橄榄油溶液,其余各组腹腔注射等体积的橄榄油,各组禁食不禁水,24 h 后麻醉取材.检测小鼠血清肝功能指标、肝组织氧化应激与炎症相关指标.通过苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和电镜观察肝组织病理变化,逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription quanti-tative real-time PCR,RT-qPCR)检测炎症相关基因的mRNA 表达,免疫荧光法检测核因子E2 相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和p65 蛋白的表达水平.结果 Control 组、CGA 组肝细胞形态完整,无炎性细胞浸润;相较于 Control 组,CGA 肝脏 Nrf2 蛋白表达显著升高.与 Control 组比较,CCl4 组血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyl transferase,γ-GT)活性明显升高(P<0.05);肝组织大面积肝细胞坏死、超微结构破损,大量炎性细胞浸润;肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量显著升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的活性显著降低(P<0.05),肝脏肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA 表达水平上调,血红素加氧酶(heme oxygenase 1,HO-1)和谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)的 mRNA 表达水平显著下调,p65 蛋白的表达显著增加.CGA 预处理可逆转上述各项异常指标,减轻肝组织病理损伤,下调促炎基因表达,促进 Nrf2 入核并上调 HO-1、GCLC,同时抑制 p65 蛋白活化.结论 CGA 可能通过激活 Nrf2 通路增强抗氧化活性,并抑制核因子 κB(nuclear factor κB,NF-κB)介导的炎症反应,从而改善 CCl4 诱导的小鼠 ALI.