增液承气汤调控PD-1/PD-L1信号通路对脓毒症肠功能障碍大鼠免疫抑制的影响研究OA

目的观察增液承气汤对脓毒症肠功能障碍大鼠免疫抑制和程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体-配体1(PD-L1)信号通路的影响,探讨其调节免疫抑制的作用机制。方法将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为4组,每组20只。增液承气汤组给予增液承气汤(10 mg生药/mL)灌胃,PD-1/PD-L1抑制剂组给予PD-1/PD-L1抑制剂(200μg/mL)腹腔注射,假手术组与脓毒症组灌胃相应体积生理盐水,均1次/d。干预1周后,除假手术组外,其余组大鼠采取盲肠结扎穿孔术建立脓毒症肠功能障碍模型。术后48 h处死各组大鼠,HE染色观察回肠组织病理形态并计数淋巴细胞和杯状细胞数量,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测回肠组织中PD-1蛋白表达情况,流式细胞术检测血液中淋巴细胞凋亡率、CD4^(+)和CD8^(+)表达占比、CD4^(+)和CD8^(+)细胞表面PD-1表达占比,TUNEL法检测胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡率。结果假手术组无大鼠死亡,脓毒症组存活10只,PD-1/PD-L1抑制剂组存活13只,增液承气汤组存活14只。与假手术组比较,脓毒症组大鼠肠上皮变性、脱落,黏膜层炎症细胞侵袭;回肠组织中淋巴细胞和杯状细胞数量均明显减少(P均<0.05);血清IL-6、TNF-α水平均明显升高(P均<0.05),血清IL-10水平明显降低(P<0.05);肠组织中PD-1蛋白相对表达量、血液中淋巴细胞凋亡率、血液中CD4^(+)和CD8^(+)细胞表面PD-1表达占比、胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡率均明显升高(P均<0.05),血液中CD4^(+)和CD8^(+)占比均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,PD-1/PD-L1抑制剂组和增液承气汤组大鼠肠黏膜炎性细胞浸润减少;回肠组织中淋巴细胞和杯状细胞数量均明显增加(P均<0.05);血清IL-6、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),血清IL-10水平均明显升高(P均<0.05);肠组织中PD-1蛋白相对表达量、血液中淋巴细胞凋亡率、血液中CD4^(+)和CD8^(+)细胞表面PD-1表达占比、胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05),血液中CD4^(+)和CD8^(+)占比均明显升高(P均<0.05)。增液承气汤组血清IL-6、IL-10、TNF-α水平及肠组织中PD-1蛋白相对表达量、血液中CD4^(+)和CD8^(+)细胞表面PD-1表达占比、胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡率与PD-1/PD-L1抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论增液承气汤可能通过抑制PD-1/PD-L1信号通路而改善脓毒症肠功能障碍大鼠免疫抑制,减轻炎症反应,修复肠黏膜。