二精丸调控miR-26a/PTEN-PI3K-Akt通路改善糖尿病视网膜神经变性的机制研究OA

目的整合网络药理学预测、分子对接验证及动物实验数据,系统阐释二精丸(RJW)调控微小RNA-26a/第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(miR-26a/PTEN-PI3K-Akt)通路改善糖尿病视网膜神经变性(DRN)的机制。方法采用TCMSP、HERB数据库筛选RJW活性成分及靶点,从GeneCards、OMIM数据库获取DRN疾病靶点并取交集;借助Cytoscape 3.9.1构建蛋白相互作用网络筛选核心靶点,通过AutoDock Vina 1.2.3开展活性成分与核心靶点的分子对接。将35只SPF级BN雄性大鼠随机分组,经连续4 d腹腔注射STZ建立糖尿病模型,分为模型组(MOD组)、羟苯磺酸钙组(CDC组)、RJW低剂量组(PLL组)、RJW高剂量组(PLH组),另设正常对照组(CON组)。CDC组大鼠给予135.0 mg·kg^(-1)羟苯磺酸钙溶液;PLH组和PLL组大鼠分别灌胃给予6.0 g·kg^(-1)和1.5 g·kg^(-1)RJW冻干粉溶液;MOD组和CON组大鼠给予等体积生理盐水,连续干预12周。采用逆转录实时荧光定量PCR、免疫荧光染色、ELISA分别检测各组大鼠视网膜组织相关mRNA、蛋白及神经保护因子表达情况。结果筛选得RJW活性成分32个、药物靶点4774个、DRN疾病靶点693个、交集靶点329个;核心靶点为抑癌蛋白(TP53)、E1A结合蛋白P300(EP300)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1(PIK3R1)、β-连环蛋白(CTNNB1),核心通路为PI3K-Akt通路,β-谷甾醇等核心成分与核心靶点结合能均低于-7.0 kcal·mol^(-1),提示化合物与靶点具有较强的结合活性。动物实验显示,与CON组相比,MOD组大鼠视网膜miR-26a mRNA表达显著降低,PTEN、GFAP的mRNA及荧光表达水平显著升高,PEDF、SST、NGF、IRBP水平显著降低(均为P<0.05)。与MOD组相比,CDC组可显著下调PTEN、GFAP mRNA表达,降低GFAP荧光强度,上调PEDF、SST、NGF水平(均为P<0.05);PLL组可显著抑制PTEN、GFAP mRNA表达,提升SST水平(均为P<0.05);PLH组可显著上调miR-26a mRNA表达,同时显著下调PTEN、GFAP mRNA表达和荧光强度,提升IRBP、PEDF、SST水平(均为P<0.05)。结论RJW通过调控miR-26a/PTEN-PI3K-Akt级联通路,有望抑制视网膜神经细胞凋亡;靶向下调Müller细胞活化标志物GFAP表达,协同上调IRBP、PEDF、SST等视网膜神经保护因子。