沉默信息调节因子1调控TGF-β/Smad3信号通路对人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的影响OA

目的探讨沉默信息调节因子1(Sirt1)对转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)中上皮间充质转化(EMT)的影响及机制。方法以LECs系HLE-B3细胞为研究对象,使用5、10、15、20、25、30、35、40μmol·L^(-1)的白藜芦醇(RSV)处理HLE-B3细胞24 h检测细胞活力,筛选RSV的最佳作用浓度,通过Western blot实验检测RSV对Sirt1的影响。使用5、10、15μg·L^(-1)的TGF-β2处理HLE-B3细胞24 h,通过Western blot实验检测波形蛋白(Vimentin)表达水平,筛选最佳TGF-β2处理浓度并建立HLE-B3细胞的后发性白内障模型。将HLE-B3细胞分为空白组、TGF-β2组、RSV+TGF-β2组。空白组细胞无处理,TGF-β2组细胞加入10μg·L^(-1)TGF-β2处理24 h,RSV+TGF-β2组细胞经10μg·L^(-1)TGF-β2处理24 h后,加入25μmol·L^(-1)RSV继续处理24 h。采用CCK-8法检测LECs的活力;免疫荧光染色观察EMT标志蛋白的定位与表达;qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中EMT相关因子,包括E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Vimentin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Smad3 mRNA和蛋白水平的表达水平。结果RSV的最佳作用浓度为25μmol·L^(-1),并且经25μmol·L^(-1)RSV处理的HLE-B3细胞中Sirt1蛋白表达上调(P<0.01)。TGF-β2的最佳作用浓度为10μg·L^(-1),用于构建后发性白内障模型。与TGF-β2组相比,RSV+TGF-β2组细胞活力显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与TGF-β2组相比,RSV+TGF-β2组E-cadherin荧光强度显著恢复,Vimentin和α-SMA荧光强度显著减弱,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与TGF-β2组相比,RSV+TGF-β2组可显著抑制TGF-β2诱导的EMT,上调E-cadherin mRNA和蛋白相对表达水平,同时下调Vimentin、α-SMA及Smad3 mRNA和蛋白相对表达水平,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论Sirt1的激活能抑制TGF-β2诱导的人LECs EMT过程,其作用机制可能与负向调控TGF-β/Smad3信号通路有关。