原头蚴外泌体对树突状细胞活化的影响及表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究OA

目的探讨原头蚴外泌体及其超滤裂解物在树突状细胞(dendritic cell,DC)活化及免疫调节中的作用,进一步为包虫感染免疫机制研究提供依据。方法采用回顾性研究方法,选取2023年7月至2024年7月于新疆维吾尔自治区儿童医院行小儿包虫病手术的30例患儿为研究对象。采集包虫病患儿囊液,分离并鉴定外泌体,制备其超滤裂解物;分选培养小鼠脾脏DC,分为阴性对照组、原头蚴外泌体组、原头蚴外泌体超滤裂解物组和阳性对照组,培养48 h后,通过流式细胞术检测DC表面活化标志物[CD11c、CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)等],反转录实时荧光定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)mRNA转录水平,高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测细胞上清液中的色氨酸浓度。统计学方法采用单因素方差分析和Bonferrin法。结果分离的外泌体呈典型外泌体形态,粒径121 nm,表达CD9、CD63;小鼠脾脏DC分选纯度>90%。流式细胞术检测结果显示,相比于阴性对照组,原头蚴外泌体组、原头蚴外泌体超滤裂解物组、阳性对照组的CD11c、CD86、CD80、CD40、MHCⅡ阳性率显著上升,且均能显著上调IDO mRNA的转录水平、降低细胞上清液中的色氨酸浓度(P值均<0.05);其中原头蚴外泌体超滤裂解物组的调控效应显著强于原头蚴外泌体组,该组IDO mRNA相对表达量达6.8±0.1、细胞上清液中的色氨酸浓度为0.23 mg/L,而原头蚴外泌体组与原头蚴外泌体超滤裂解物组的上述指标变化效应均显著弱于阳性对照组(P值均<0.05)。结论原头蚴外泌体及其超滤裂解物可促进DC活化,激活IDO-色氨酸通路,原头蚴外泌体超滤裂解物效应更显著,为深入解析包虫与宿主免疫相互作用及包虫病免疫干预提供了实验依据。