稳定表达尼帕病毒F蛋白VERO细胞系的构建及应用OA

为构建能够稳定表达尼帕病毒(Nipah virus,NiV)F蛋白的VERO细胞系,并检测其在NiV假病毒粒子扩增中的应用,使用慢病毒包装系统将编码NiV F蛋白的基因克隆至慢病毒载体中,通过转染293T细胞产生慢病毒,随后感染VERO细胞并筛选出稳定表达NiVF蛋白的细胞系。以实时荧光定量反转录PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)检测稳定细胞系中NiV F蛋白的mRNA水平;挑取细胞单克隆,利用Western blot技术检测目的细胞中F蛋白表达水平;最后,以假病毒感染试验检测该稳定细胞系是否对VSV-NiV-G假病毒易感。结果显示:目的细胞中NiVF蛋白在mRNA和蛋白水平的表达量都显著高于野生型和对照细胞(P<0.05),且VSV-NiV-G假病毒在目的细胞中成功复制并表达荧光标记蛋白,提示该细胞系能够有效支持VSV-NiV-G假病毒的多轮复制。结果表明,本研究成功建立了稳定表达NiV F蛋白的VERO细胞系,为扩增NiV假病毒粒子及评估NiV疫苗有效性提供了试验平台。