基于超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱、网络药理学和动物实验探究川西合耳菊治疗急性湿疹的作用机制OA

采用静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法,结合二级质谱图和文献鉴定川西合耳菊化学成分,通过TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库筛选成分靶点,采用Gene Cards数据库、OMIM数据库筛选急性湿疹的相关靶点,川西合耳菊成分靶点与疾病靶点取交集得到潜在作用靶点,使用String网站及Cytoscape 3.10.1软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,对潜在靶点进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,运用Cytoscape 3.10.1软件构建成分-靶点-通路网络图,并对关键靶点进行核心化合物分子对接。设计动物实验验证,通过2,4-二硝基氯苯诱导,建立了昆明小鼠(KM小鼠)急性湿疹模型,从整体动物水平评估其疗效,并采用苏木精-伊红染色(HE)、酶联免疫吸附测定、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法等技术探讨其抗炎及调控信号通路的作用。结果表明,从川西合耳菊中鉴定出59种化合物,并进一步筛选出7个潜在活性成分:异鼠李素、山柰酚、木犀草素、槲皮素、杨梅素、甜菜碱和迷迭香酸。通过靶点数据库预测,这7个成分共对应192个蛋白质作用靶点。同时,从疾病数据库中检索获得2214个与急性湿疹相关的蛋白质靶点。将上述两组靶点进行映射(取交集),共获得75个共同靶点,这些蛋白质被认为是川西合耳菊治疗急性湿疹的潜在关键靶点;分子对接结果表明异鼠李素、木犀草素、槲皮素、山柰酚、杨梅素与蛋白质靶点原癌基因酪氨酸蛋白激酶SRC及基质金属蛋白酶9均有较好的结合能力。动物实验表明,川西合耳菊可降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)以及白细胞介素17(IL-17)的含量,升高干扰素γ的含量来恢复辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)平衡,通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路来减轻炎症反应,改善急性湿疹小鼠的临床症状。综上,该方法快速、有效、全面地分析了川西合耳菊中的化学成分,揭示了川西合耳菊治疗急性湿疹的作用机制,为川西合耳菊的进一步开发利用提供了参考依据。