同步鉴别猪重大疫病病原核酸综合检测体系的构建OA

为建立同步鉴别猪重大疫病病原核酸综合检测体系,实现对O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、A型口蹄疫病毒(FMDV-A)、塞内卡病毒(SVA)、水疱性口炎病毒(VSV)、猪水疱病病毒(SVDV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的同步检测,针对FMDV-O的VP1基因、FMDV-A的VP1基因、SVA的3D基因、VSV的N基因、SVDV的VP1基因、CSFV的5′-UTR基因(猪瘟野毒株)和HCLV基因(猪瘟疫苗株)、ASFV的B646L基因(非洲猪瘟野毒株)和CD2v基因、MGF360-14L基因、I177L基因(3个非洲猪瘟疫苗株)、PRRSV的M基因(通用PRRSV毒株)和NSP2基因(美洲型经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株、类NADC34毒株)以及猪源内参ATP8基因的保守区,分别设计了17对特异性引物和探针。经优化反应条件后,建立了同步鉴别猪重大疫病病原核酸综合检测体系,并对该体系进行特异性、敏感性和重复性分析。利用该体系对本地45个猪场225份猪粪便样品、16份同批次进口种猪样品、12份疫苗样品进行检测,并与市售病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的检测结果进行对比分析。结果显示:所建立的体系具有较好的特异性,对FMDV-O、FMDV-A、SVA、VSV、SVDV、CSFV野毒株和疫苗株、ASFV野毒株和疫苗株、通用型PRRSV、美洲型经典PRRSV、高致病性PRRSV、类NADC30 PRRSV、类NADC34 PRRSV检测结果均为阳性,对15种猪腹泻病毒(猪肠道阿尔法冠状病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪捷申病毒、猪凸隆病毒、猪嵴病毒、猪星状病毒Ⅰ型、猪札幌病毒、猪萨佩罗病毒、猪博卡病毒、猪轮状病毒A、猪轮状病毒B、猪轮状病毒C、猪肠道病毒9型)和2种常见猪病病毒(伪狂犬病病毒、日本脑炎病毒)的检测结果均为阴性;该体系的最低检测限均为1.0×10^(1)copies/μL,表明敏感性较高;批内与批间重复性试验的变异系数均小于0.6%,表明重复性较好。应用所建立的体系对临床样品进行检测,与市售病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的检测结果比对,结果显示一致率达100%(Kappa值=1)。结论:本研究成功建立了同步鉴别猪重大疫病病原核酸综合检测体系,为猪重大疫病快速鉴别和流行病学调查提供了高效的技术支撑。