猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及应用OA
为获得针对猪伪狂犬病病毒(PRV)囊膜gB糖蛋白的特异性单克隆抗体(mAb)及鉴定PRV重组病毒外源蛋白表达和定位的情况,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统将PRVJM株gB蛋白(aa59~148-linkeraa546~700)进行表达,将纯化后重组gB蛋白(rgB)与201佐剂乳化免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA及亚克隆筛选阳性杂交瘤细胞株,使用mAb亚类鉴定试剂盒检测其重链和轻链类型。制备小鼠mAb腹水并纯化,采用SDS-PAGE鉴定mAb纯化效果,间接ELISA测定纯化的mAb效价。采用Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定mAb的反应性,并利用mAb通过激光共聚焦显微镜鉴定重组病毒rPRV-GP5-Flag外源蛋白表达及定位。结果显示,间接ELISA筛选到1株单克隆杂交瘤细胞株可以持续表达PRVgB抗体,命名为3C4A。mAb亚类鉴定其为IgG1/κ型。SDS-PAGE结果显示,纯化后mAb重链、轻链条带清晰且单一,间接ELISA显示纯化后的mAb与rgB具有高亲和力。Western-blot和IFA检测均表明本研究筛选的mAb能够特异性识别PK-15细胞中PRV表达的gB蛋白,证明制备的抗PRVgB蛋白mAb可用于重组病毒rPRV-GP5-Flag在细胞内感染情况的检测。同时,也可以为PRV的相关研究及新型疫苗的开发提供良好的检测用抗体。
刘云飞;俞机敏;王尚辉;韩龙菲;赵湘;张朝霞;翁长江
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室基础免疫创新团队,黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省兽医免疫学重点实验室,黑龙江哈尔滨150069
农业科技
猪伪狂犬病病毒单克隆抗体gB蛋白PRV重组活疫苗
《中国兽医科学》 2026 (6)
P.805-811,7
中国农业科学院科技创新工程项目(CAAS-CSLPDCP-202401)。
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