β-胡萝卜素优化绵羊卵母细胞玻璃化冷冻效果的研究OA

为研究向冷冻保护剂中添加β-胡萝卜素(β-caro)是否能减轻玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞的损伤,将未成熟卵母细胞随机分为4组,即新鲜卵母细胞组(n=108)以及分别添加0(n=98)、15(n=103)和50μmol/L(n=101)β-caro的冷冻组,以新鲜卵母细胞组作为对照组。不同浓度β-caro冷冻组均采用两步法进行玻璃化冷冻和解冻处理。玻璃化冷冻处理时,在冷冻保护剂VS1中不添加β-caro,在冷冻保护剂VS2中添加不同浓度β-caro。各组试验同时进行,GV期卵丘卵母细胞复合体玻璃化冷冻解冻后放入同浓度体外成熟液中培养24 h后统计各项指标,包括绵羊卵母细胞存活、形态、透明带厚度及硬度、活性氧(ROS)含量、第一极体(PB1)排出、氧化及凋亡相关基因表达。结果显示,冷冻后0μmol/Lβ-caro冷冻组卵母细胞存活率及形态正常率与新鲜卵母细胞组相比显著降低(P<0.001),而添加15μmol/Lβ-caro可显著改善玻璃化冷冻后卵母细胞存活率及形态正常率(P<0.001);与新鲜卵母细胞组相比,冷冻组卵母细胞的透明带厚度无统计学差异(P>0.05);经玻璃化冷冻后的卵母细胞透明带消化所需时间显著延长(P<0.001),但添加15μmol/Lβ-caro时,冷冻组与新鲜卵母细胞组相比无显著差异(P>0.05);冷冻造成卵母细胞损伤,其PB1排出率显著降低(P<0.001),同时解冻后卵母细胞内ROS含量显著升高(P<0.001);然而,添加15μmol/Lβ-caro后,PB1排出率及ROS含量与新鲜卵母细胞组均无显著差异(P>0.05);冷冻会导致卵母细胞SOD1(P<0.001)、BAX(P<0.001)表达水平显著升高及Bcl-2(P<0.05)、Caspase-8(P<0.001)表达水平的显著降低,而添加15μmol/Lβ-caro可显著改善冷冻后SOD1(P<0.001)、BAX(P<0.001)、Bcl-2(P<0.05)及Caspase-8(P<0.001)的表达水平。结果表明,添加15μmol/Lβ-caro能够通过抗氧化和抗凋亡途径显著改善玻璃化冷冻后绵羊卵母细胞质量和发育潜能,为优化绵羊卵母细胞玻璃化冷冻体系提供参考依据。