补肾健脾方促进尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化相关基因和蛋白表达的研究OA

目的观察尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化相关基因和蛋白表达的变化及补肾健脾方的作用。方法大鼠随机分为正常、悬吊、补肾健脾高剂量、补肾健脾中剂量和补肾健脾低剂量共5组。悬吊、中药组大鼠-30度头低位尾部悬吊连续21 d造模,中药组大鼠从造模当天开始分别给予补肾健脾方高、中、低剂量灌胃,剩下各组灌服等容积生理盐水。悬吊第22 d取材各组大鼠,全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,取第3代细胞进行成骨分化诱导实验,成骨分化诱导第21 d,采用Real Time PCR法和蛋白质印迹检查法分别检测骨钙素(osteocalcin,OC)、cbfα1和Smad3的mRNA和蛋白表达。并采用股骨HE染色法观察骨小梁分离度。结果较之正常组,悬吊组成骨诱导后大鼠BMSCs的OC、cbfα1结果和Smad3的mRNA及蛋白的表达显著下降,骨小梁分离度显著增加;较之悬吊组,补肾健脾组成骨诱导大鼠BMSCs后的OC、cbfα1、Smad3的mRNA和蛋白表达均随给药剂量的增加而增加,骨小梁分离度随着给药剂量的增加而明显降低。结论补肾健脾方对尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化作用具有正向促进作用,其作用机制可能与提高成骨细胞活性、促进骨形成有关。