基于NF-κB/NLRP3/Smad信号通路探讨加味参苓白术散改善特发性肺纤维化的机制OA

目的探究加味参苓白术散是否通过NF-κB/NLRP3/Smad信号通路改善特发性肺纤维化及其作用机制。方法将60只雌雄各半的SD大鼠随机分成正常组、模型组、吡非尼酮组、加味参苓白术散低、中、高剂量组。除正常组,余各组均进行气管滴注博来霉素进行IPF造模,造模后中药组进行低、中、高浓度药物进行灌胃,吡非尼酮组予以吡非尼酮灌胃,正常组予以等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,28 d后,处死大鼠取肺组织进行HE、Masson染色;选用RAW264.7小鼠巨噬细胞,将其分为正常组、模型组、模型+正常血清组、模型+NF-κB抑制剂组、模型+加味参苓白术散含药血清低、中、高剂量组。通过CCK8法确定含药血清干预浓度及LPS诱导浓度,培养48 h后,进行酶联免疫吸附法检测IL-1β、IL-18、TGF-β、TNF-ɑ含量;蛋白免疫印迹检测p-P65、p-smad2、p-smad3、NLRP3蛋白相对表达量。结果与正常组相比,模型组中肺组织炎细胞浸润显著,成纤维细胞异常增生,纤维组织广泛沉积;与模型组相比,各给药组肺泡结构的改变均有不同改善,胶原纤维增生较少,以吡非尼酮组及加味参苓白术散高剂量组较为显著。与正常组相比,模型组中IL-1β、IL-18、TGF-β、TNF-ɑ含量及p-P65、p-smad2、p-smad3、NLRP3蛋白相对表达量均明显升高(P<0.01);与模型组相比,NF-κB抑制剂组、中剂量含药血清组及高剂量含药血清组中IL-1β、IL-18、TGF-β、TNF-ɑ含量均明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,NF-κB抑制剂组、中剂量含药血清组及高剂量含药血清组中p-P65、p-smad2、p-smad3、NLRP3蛋白相对表达量明显降低(P<0.01,P<0.05),低剂量含药血清组中p-P65、p-smad3蛋白相对表达量明显降低(P<0.05)。结论加味参苓白术散可通过干预NF-κB信号通路,抑制NLRP3炎症小体激活介导细胞焦亡,从而影响TGF-β/Smad信号通路触发EMT,进而改善特发性肺纤维化。