基于UPLC-MS、网络药理学和斑马鱼模型的白蓼花抗炎机制和活性成分研究OA

目的基于超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术、斑马鱼模型以及体外实验(RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞模型),多维度探究白蓼花的抗炎活性成分和作用机制。方法对鲜白蓼花进行提取,得到白蓼花总提取物,采用UPLC-MS技术对白蓼花总提取物进行成分鉴别,通过体外建立脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞模型,采用CCK-8法检测不同浓度白蓼花提取物处理的巨噬细胞存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测白蓼花提取物处理巨噬细胞分泌炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平变化,并建立斑马鱼断尾诱导的机械损伤炎症,用荧光显微观察斑马鱼皮肤中性粒细胞募集情况,评价白蓼花提取物对斑马鱼炎症模型的作用。最后通过网络药理学对白蓼花有效成分的抗炎机制进行预测分析。结果UPLC-MS分析鉴定白蓼花总提取物含有32种成分,主要包括黄酮及其衍生物类成分,如槲皮素、芦丁、山柰酚及其苷类等,此外还含有酚酸类、核苷类、氨基酸类、萜类、有机酸类等。细胞实验结果显示,6.25μg·mL^(-1)白蓼花提取物对正常巨噬细胞及LPS诱导的巨噬细胞均有抑制作用,用白蓼花提取物处理24 h后,巨噬细胞中的IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),斑马鱼实验结果显示,与对照组相比,模型组斑马鱼背部和腹部皮肤中性粒细胞数量增加(P<0.001),表现出中性粒细胞迁移,经白蓼花提取物处理后,能抑制中性粒细胞迁移,且呈剂量依赖性。结论白蓼花提取物通过抑制巨噬细胞的生长、巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达和中性粒细胞的迁移抑制表皮炎症浸润,从而发挥抗炎作用。ELISA实验表明网络药理学发现白蓼花可能是通过槲皮素、山柰酚、芹菜素、异鼠李素、杨梅素等关键成分作用于TNF、Akt1、ALB、EGFR等核心靶点网络,进而通过PI3K-Akt和MAPK通路发挥抗炎疗效。