血小板RNA干扰技术的建立与优化OA
血小板是血液中最小的无核血细胞,其中丰富的RNA和蛋白质是发挥凝血、免疫等功能的分子基础。RNA干扰是研究血小板基因功能的有力工具,但相关研究还处于初步探索阶段,目前尚无有效、稳定的血小板RNA干扰技术。为了建立高效、稳定的血小板RNA干扰技术,以小鼠外周血血小板为研究对象,分别从转染试剂、干扰RNA类型等方面进行体系优化。通过监测核酸转染效率、维持时间、血小板存活状态、基因干扰效率等进行系统评价,最终建立了以Mate Plus脂质纳米颗粒代替经典阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000、单链反义寡核苷酸代替传统双链小干扰RNA的高效RNA干扰体系,将干扰RNA的转染效率从10%以下提高至70%以上,且维持稳定转染48 h以上。在此基础上,以血小板中表达丰度极高的胸腺素β4(thymosinβ4,Tmsb4x)基因为例,成功利用ASO/Mate-Plus体系实现Tmsb4x基因的有效敲降,其RNA水平降低30%以上。但是,Tmsb4x基因的敲降并不影响其蛋白表达,提示其可用于特异性研究血小板中RNA的功能。同时,仅Tmsb4x RNA的敲降可显著影响活化血小板的黏附铺展功能,提示该基因可能存在独立于蛋白外的RNA功能。综上,建立与优化的血小板RNA干扰技术,为研究血小板特定RNA功能以及血小板快速功能响应的分子基础提供了有力的工具。
伍宇婷;梁炜;王洪涛;刘翠翠;周家喜
中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),北京协和医学院,血液与健康全国重点实验室,国家血液系统疾病临床医学研究中心,细胞生态海河实验室,天津300020 天津医学健康研究院,天津301600中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),北京协和医学院,血液与健康全国重点实验室,国家血液系统疾病临床医学研究中心,细胞生态海河实验室,天津300020 天津医学健康研究院,天津301600中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),北京协和医学院,血液与健康全国重点实验室,国家血液系统疾病临床医学研究中心,细胞生态海河实验室,天津300020 天津医学健康研究院,天津301600中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),北京协和医学院,血液与健康全国重点实验室,国家血液系统疾病临床医学研究中心,细胞生态海河实验室,天津300020 天津医学健康研究院,天津301600中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),北京协和医学院,血液与健康全国重点实验室,国家血液系统疾病临床医学研究中心,细胞生态海河实验室,天津300020 天津医学健康研究院,天津301600
生物科学
血小板RNA干扰小干扰RNA反义寡核苷酸胸腺素β4
《生物技术进展》 2026 (3)
P.665-676,12
国家杰出青年科学基金项目(82125003)国家自然科学基金重点项目(82430009)国家自然科学基金面上项目(32571301)天津市杰青项目(24JCJQJC00110)。
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