补阳益胃汤抑制TRPM2介导的线粒体自噬逆转胃癌顺铂耐药作用的机制研究OA

目的基于TRPM2介导的线粒体自噬探讨补阳益胃汤改善胃癌顺铂化疗耐药的潜在作用机制。方法20只SD大鼠随机分为中药组与空白血清组,每组10只。中药组给予补阳益胃汤水煎浓缩液17.68 g/kg灌胃,空白血清组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续7 d。末次灌胃后1 h,于无菌条件下经腹主动脉采血,采用CCK-8法检测不同浓度含药血清对MKN-45/DDP细胞活力的影响,确定后续实验所用最佳安全有效浓度。后续实验设置肿瘤对照组、顺铂组(10µmol/L顺铂)、顺铂+TRPM2抑制剂组(10µmol/L顺铂+50µmol/L TAT-M2NX)及顺铂+中药含药血清组(10µmol/L顺铂+10%含药血清),处理24 h。采用免疫荧光技术检测TRPM2蛋白表达水平,自噬关键蛋白LC3B、PINK1、Parkin的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡水平;采用ELISA法检测CRT、HMGB1和IFN-β的水平;运用分子对接技术模拟复方主要活性成分与TRPM2蛋白的结合潜能。结果肿瘤对照组和顺铂组MKN-45/DDP细胞中TRPM2、LC3B、PINK1和Parkin均呈高表达状态,给予TRPM2抑制剂与补阳益胃汤含药血清干预后,TRPM2荧光水平显著下调(P<0.01),自噬相关蛋白LC3B、PINK1和Parkin表达水平显著降低(P<0.05);顺铂+TRPM2抑制剂组和顺铂+中药含药血清组细胞凋亡水平较顺铂组显著升高(P<0.05),CRT、HMGB1和IFN-β的水平较顺铂组显著升高(P<0.01,P<0.05)。分子对接提示,复方中黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、川芎嗪、阿魏酸等成分与TRPM2蛋白具有较好的结合亲和力。结论补阳益胃汤可能通过抑制TRPM2的表达与功能,进而阻断过度活跃的线粒体自噬,从而削弱胃癌顺铂耐药细胞的生存抵抗,增强其对化疗药物的敏感性。