基于TIPE2/TLR4-NF-κB通路探讨大黄素对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用OA

目的探讨大黄素对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用及机制。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+大黄素组和正常+大黄素组,模型+大黄素组和正常+大黄素组给予大黄素40 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃7 d,正常组及模型组给予羧甲基纤维素钠处理,于实验第5天给药4 h后,模型组和模型+大黄素组50 mg·kg^(-1)·d^(-1)给予α-萘异硫氰酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)灌胃1次建立肝内胆汁淤积模型,其余两组予以橄榄油对照处理,建模后48 h处死动物,收集标本。HE染色观察肝脏病理改变;采用比色定量法检测各组实验动物血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)、血清总胆红素(total bilirubin,TBiL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBiL)和总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平;采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肝脏组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量;实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测单个核细胞肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factor-α-induced protein8-like2,TIPE2)及肝组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)mRNA表达;蛋白质印迹法(western blot,WB)检测肝组织TLR4、NF-κB和TIPE2蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组血清ALT、AST、GGT、TBiL、DBiL、TBA浓度及肝组织MDA、MPO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.01);TIPE2 mRNA及蛋白水平表达下调(P<0.01),TLR4及NF-κB表达均升高(P<0.01)。与模型组相比,给予大黄素治疗后显著降低血清ALT、AST、GGT、TBiL、DBiL、TBA浓度及肝组织MDA、MPO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量(P<0.01);TIPE2 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01),下调TLR4及NF-κB表达(P<0.05,P<0.01)。结论大黄素可通过上调TIPE2的表达,抑制TLR4-NF-κB信号通路过度激活,进而抑制氧化应激及炎症反应,减轻胆汁淤积,发挥其保护作用。