超微可溶钌纳米颗粒对H_(2)O_(2)诱导的肺上皮细胞氧化应激损伤的缓解作用及其机制OA

目的制备水溶性、生物相容性良好的超微可溶钌纳米颗粒(sRuNP),评估其对H_(2)O_(2)诱导的肺上皮细胞氧化应激损伤的缓解作用及其可能的机制。方法采用热分解结合配体交换法合成sRuNP,采用透射电子显微镜、粒径分析及X线光电子能谱(XPS)观察其形貌、粒径、元素组成、价态和表面化学特征,及其在生理盐水与RPMI-1640完全培养基中的体外分散稳定性。采用CCK-8法检测不同浓度s RuNP对肺上皮细胞A549活性的影响。将A549细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+sRuNP(10μg/ml)组,采用Calcein-AM/PI双染检测细胞死亡情况,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blotting检测乙酰化SOD2(ac-SOD2)和SOD2的表达水平。结果制备的s RuNP粒径为(2.00±0.18)nm;XPS结果显示,sRuNP样品中存在明显的钌(Ru)、碳及氧元素的特征峰,Ru主要以Ru^(0)和Ru^(4+)形式存在,元素特定电子轨道的高分辨谱分析显示,碳1s和氧1s谱提示颗粒表面存在有机配体修饰;0、4、40、400μg/ml sRuNP在25℃生理盐水中放置24 h,0、1、10μg/ml sRuNP在37℃RPMI-1640完全培养基中放置24 h,均未见明显沉淀。1μg/ml和10μg/ml sRuNP处理24 h,A549细胞活性与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞死亡增多,MDA含量增高,SOD活性降低,ac-SOD2/SOD2比值增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+sRuNP组细胞死亡减少,MDA含量下降,SOD活性升高,ac-SOD2/SOD2比值下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论10μg/ml sRuNP在体外的稳定性和生物安全性良好,对肺上皮细胞的抗氧化作用明显,抑制SOD2乙酰化是可能的分子机制。