牛bta-miR-15a靶基因的预测及其在脂肪细胞分化过程中的表达模式鉴定OA

为了探究bta-miR-15a的生物学特性,鉴定其在脂肪分化过程中的表达模式,应用生物信息学分析方法,研究miR-15a在不同物种中的保守性,预测其潜在靶基因,并对其进行功能富集分析。应用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术鉴定miR-15a在牛背最长肌、皮下脂肪中的相对表达量,探究其在肌内前体脂肪细胞不同分化阶段的表达模式。结果表明,miR-15a在不同物种间具有高度保守性;借助TargetScan、miRWalk软件共预测出7582个候选靶基因,整合后得到462个候选的共有靶基因;靶基因主要在对生长因子的应答、细胞分化的负调控及Wnt信号通路等基因本体(GO)条目上富集。基于京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库的信号通路富集分析结果显示,其靶基因主要富集在Notch、丝裂原活化蛋白质激酶(MAPK)、鞘脂等信号通路中。进一步通过RT-qPCR分析发现,bta-miR-15a在安格斯牛、西门塔尔牛皮下脂肪中的相对表达量极显著高于背最长肌中的相对表达量(P<0.01),并且其在西门塔尔牛皮下脂肪中的相对表达量显著高于安格斯牛皮下脂肪中的相对表达量(P<0.05),在安格斯牛中,成年牛背最长肌组织中的相对表达量极显著高于犊牛背最长肌组织(P<0.01)。研究还发现,bta-miR-15a在牛肌内脂肪分化阶段的时序表达过程中呈现先上升后下降的变化。上述结果表明,bta-miR-15a在牛脂肪的沉积过程中扮演重要角色,为探究其在脂肪细胞成脂分化过程中的调控作用奠定了基础。