金黄色葡萄球菌隐匿预定植(“伏邪”)序贯感染H1N1流感小鼠模型的建立及发病机制初步探索OA

目的建立符合中医“伏邪”理论的金黄色葡萄球菌(金葡菌)隐匿预定植(“伏邪”)序贯感染H1N1流感病毒致重症肺炎小鼠模型,初步探索“伏邪”在继发感染H1N1流感病毒重症疾病模型中的致病机制。方法Balb/c小鼠滴鼻定植金葡菌,分别于第30、45、60天序贯感染H1N1流感病毒,染毒7 d后安乐死并解剖取材。测定肺、脾、胸腺指数评估脏器损伤,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学特征,RT-qPCR检测肺组织中病毒载量及炎症因子表达水平,结合流式细胞术分析肺泡巨噬细胞分型。结果金葡菌隐匿预定植后,小鼠一般状态良好,体质量呈稳定上升趋势。序贯感染H1N1病毒后,流感组及金葡菌+流感组小鼠体质量显著下降(P<0.001),其中金葡菌+流感组下降更为明显。脏器指数结果显示,流感组及金葡菌+流感组小鼠肺指数显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。病理学结果显示,流感组及金葡菌+流感组小鼠肺组织均表现出肺泡壁增厚及结构破坏,金葡菌+流感组病变更为严重。随金葡菌定植时间延长,金葡菌+流感组体质量及病理损伤程度逐渐趋近于流感组;RT-qPCR结果显示,两组小鼠肺组织病毒载量显著升高(P<0.001),炎症相关因子基因表达水平均上调。流式细胞术结果表明,金葡菌隐匿预定植30 d后,与正常组相比,金葡菌组M2型肺泡巨噬细胞比例显著性升高(P<0.01);流感组、金葡菌+流感组的M1型肺泡巨噬细胞比例显著增加(P<0.001),金葡菌+流感组的M2型巨噬细胞亦显著提高(P<0.01)。隐匿预定植45及60 d后,正常组与金葡菌组、流感组与金葡菌+流感组间肺泡巨噬细胞分型无显著性差异。结论金葡菌隐匿预定植会导致继发感染H1N1流感病毒时机体损伤加重,随定植时间延长对机体影响逐渐降低。本研究发现,金葡菌隐匿预定植30 d后再序贯感染H1N1流感病毒可建立符合中医“伏邪”理论的重症肺炎小鼠模型;初步机制研究表明金葡菌预定植可调控宿主肺泡巨噬细胞向M2型极化,降低机体免疫应答,进而在序贯感染H1N1流感时出现严重的肺病理损伤。