A2型星形胶质细胞外泌体递送miR-133a-3p对血脑屏障损伤体外模型的修复作用及其机制OA

目的观察A2型星形胶质细胞外泌体(A2-As-Exo)及其携带的微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导血脑屏障(BBB)损伤体外模型的修复作用,并探讨其机制。方法流式细胞术分选OGD/R后的A2-As,提取并鉴定外泌体(A2-As-Exo)。将人脑微血管内皮细胞(HBMVECs)接种于铺有胶原蛋白的Transwell小室膜上室内侧,建立单层内皮细胞模型,给予OGD/R处理,并分为对照组、外泌体组、miR-133a-3p抑制剂组、miR-133a-3p模拟物组。对照组加入PBS;外泌体组加入A2-As-Exo;miR-133a-3p抑制剂组、miR-133a-3p模拟物组分别使用Lipofectamine 2000转染miR-133a-3p模拟物和抑制剂,转染6 h后更换培养基,并与A2-As-Exo共培养48 h。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白及PI3K/AKT信号通路蛋白,采用透射电镜观察紧密连接超微结构,采用管腔形成实验评估血管生成情况。结果外泌体组、miR-133a-3p模拟物组细胞凋亡率低于对照组和miR-133a-3p抑制剂组(P均<0.01)。外泌体组、miR-133a-3p模拟物组p-AKT、Bcl-2表达高于对照组和miR-133a-3p抑制剂组,Bax、Caspase-3表达低于对照组和miR-133a-3p抑制剂组(P均<0.01)。透射电镜观察显示,外泌体组紧密连接连续、完整,miR-133a-3p抑制剂组结构破坏,miR-133a-3p模拟物组最致密。外泌体组、miR-133a-3p模拟物组血管生成率高于对照组和miR-133a-3p抑制剂组(P均<0.01)。结论A2-As‐Exo通过递送miR‐133a‐3p,激活PI3K/AKT通路,抑制内皮细胞凋亡,维持紧密连接完整性并促进血管生成,从而有效修复OGD/R诱导的BBB损伤。