小菜蛾PxyBrC-Z2/3 BTB结构域与PxyRACK1蛋白互作的验证OA

【目的】验证小菜蛾Plutella xylostella BrC家族亚型Z2/3(PxyBrC-Z2/3)是否通过其BTB结构域与活化的蛋白激酶C1受体(receptor for activated C kinase 1,RACK1)在蛋白水平发生互作。【方法】利用C2H2锌指结构和BTB结构域对小菜蛾BrC蛋白家族进行系统进化分析和同源比对后,利用AlphaFold 3.0对小菜蛾BrC家族亚型PxyBrC-Z1,PxyBrC-Z2/3,PxyBrC-Z4和PxyBrC-Z7与PxyRACK1进行分子对接模拟;克隆小菜蛾PxyBrC-Z2/3和PxyRACK1 cDNA片段,构建重组质粒;利用酵母双杂交与GST Pull-Down技术验证小菜蛾PxyBrC-Z2/3亚型的BTB结构域与PxyRACK1的互作。【结果】同源比对结果表明,小菜蛾PxBrC-Z1,PxyBrC-Z2/3和PxyBrC-Z4亚型的BTB结构域同源性为100%;分子对接模拟发现PxBrC-Z1,PxyBrC-Z2/3,PxyBrC-Z4和PxyBrC-Z7与PxyRACK1的结合均主要发生在BTB结构域。酵母双杂交及GST Pull-Down实验进一步证实,PxyBrC-Z2/3亚型在体内外均能与PxyRACK1形成稳定的互作复合体。【结论】本研究在分子水平证实小菜蛾转录因子PxyBrC-Z2/3与PxyRACK1存在特异性互作,明确了PxyBrC-Z2/3通过BTB结构域介导激素信号转导的分子基础,完善了20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)调控其变态发育的信号转导机制。