地熊蜂储存蛋白Hex70a的抗体制备及在不同营养条件下的表达分析OA

【目的】熊蜂Hex70a作为一种重要的储存蛋白,为熊蜂的基础代谢和生长发育提供营养,尤其是在维持熊蜂蜂王滞育期间的营养代谢发挥着重要作用。本研究旨在制备Hex70a抗体,检测不同营养条件对熊蜂体内Hex70a表达的影响。【方法】利用生物信息学软件对地熊蜂Bombus terrestris Hex70a的疏水性、抗原性及亲水性等理化性质进行分析;设计制备Hex70a的抗体多肽,然后将合成的肽段与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联后免疫新西兰白兔,收集兔抗体血清,并利用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定抗体效价;分别用50%糖水、50%糖水与花粉混合物饲喂地熊蜂蜂王3 d时,利用Western blot检测Hex70a的表达量。【结果】Hex70a在第426-437位氨基酸序列亲水性及抗原性高于其他氨基酸序列片段;合成的多肽为CRYKMHQTPYNKD,免疫新西兰白兔后获得了Hex70a抗体,效价达到1∶256000。Western blot结果显示,50%糖水与花粉混合物处理组检测到Hex70a的明显条带,具有较强的特异性,而50%糖水处理组没有检测到Hex70a任何条带。【结论】本研究成功制备了地熊蜂Hex70a抗体,能特异性识别地熊蜂Hex70a,为准确检测地熊蜂体内Hex70a表达量提供了可靠的检验工具,为检测熊蜂营养健康水平提供了一种有效的方法,并为进一步研究储存蛋白在熊蜂发育中的功能奠定基础。