中华按蚊体壁中表达Cas9的转基因品系构建OA
【目的】以中华按蚊Anopheles sinensis蛹后期至成虫期的体壁中高表达的表皮蛋白基因AsCPR75的启动子序列为调控元件,创制可在蛹-成虫期体壁中转录Cas9的中华按蚊转基因遗传改造品系。【方法】基于中华按蚊组织(中肠、马氏管、卵巢、脂肪体、触角、唾液腺、精巢和体壁)转录组数据集系统筛选其体壁中高量表达的表皮蛋白基因,利用qPCR验证候选基因在不同发育阶段(卵、1-4龄幼虫、蛹和成虫)及成虫头胸和腹中的表达量;选取目标基因翻译起始位点上游4000 bp的序列作为候选启动子区,构建可驱动Cas9条件性转录的转基因质粒,并通过胚胎显微注射中华按蚊雌成蚊,对子代个体进行荧光筛选,利用反向PCR检测阳性个体中转基因表达盒的插入位点,利用qPCR检测转基因品系在不同发育阶段(蛹和成虫)及羽化0 h成虫体壁中Cas 9的转录表达量。【结果】筛选到在中华按蚊蛹后期至成虫期体壁中高表达的表皮蛋白基因AsCPR75。qPCR分析证实AsCPR75自蛹期24 h上调表达,至成虫期0 h具有最高的表达量。AsCPR75在成虫头胸和腹中高表达,且腹部体壁中的表达量明显高于腹部其他部位的;构建了pBac-[3XP3-EGFP-SV40-AsCPR75-promoter-Cas9-SV40]转基因质粒;在G_(1)代中筛选到幼虫单眼和成虫复眼呈现绿色荧光的转基因个体。反向PCR分析确认了两个转基因品系中外源表达盒分别插入到scaffold25的第487522位和scaffold14的第29949095位碱基处。进一步检测显示,转基因阳性个体中可检测到Cas9的转录表达,且其时期表达趋势与内源AsCPR75基本一致。【结论】本研究成功构建了可介导Cas9在中华按蚊体壁中稳定表达的转基因品系。这可为后续着眼于中华按蚊体壁的条件性基因组编辑,以及将体壁作为靶标组织的蚊虫遗传控制策略的建立提供有价值的工具素材。
谢新元;杨永欣;凌瑕;邹其黎;蒋艳萍;王思艺;罗灿;胡敏;陈斌;周操;乔梁
重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学新闻与传媒学院,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所,媒介生物控制和利用重庆市重点实验室,重庆401331
生物科学
中华按蚊表皮蛋白基因AsCPR75体壁转基因Cas9条件性转录
《昆虫学报》 2026 (5)
P.775-782,8
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