基于UPLC-Q-TOF-MS与网络毒理学的川楝子炮制减毒物质基础研究OA

目的:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatographyquadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)联合化学计量学和网络毒理学方法,探讨川楝子炮制减毒的物质基础及潜在机制。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定川楝子化学成分,并结合主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squaresdiscriminant analysis,OPLS-DA)筛选炮制前后的主要差异成分;比较生品、盐制品和醋制品中异川楝素、川楝素的提取离子流图及含量差异;基于网络毒理学筛选二者潜在的肝毒性靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,进行分子对接、分子动力学模拟验证。结果:共鉴定出11种化学成分,主要包括酚酸及酚醛类、黄酮及其苷类、三萜类和脂肪酸类成分,其中异川楝素和川楝素经对照品比对得到确认。PCA和OPLS-DA结果显示,生品、盐制品和醋制品的已鉴定成分谱存在差异,异川楝素和川楝素为主要差异成分。提取离子流图及含量测定结果显示,炮制后异川楝素和川楝素的峰强度及含量均降低;生品、盐制品和醋制品中异川楝素的平均含量分别为1.87、1.06、0.89 mg/g,川楝素分别为1.01、0.45、0.39 mg/g,均呈生品最高、盐制品次之、醋制品最低的趋势。网络毒理学分析获得23个肝毒性相关共同靶点,PPI网络筛选出原癌基因Jun(Jun proto-oncogene,JUN)、基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)、雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)等核心靶点;富集分析显示,主要涉及炎症免疫反应、应激损伤、细胞增殖与凋亡失衡及脂质代谢紊乱等过程,并富集于肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K-Akt)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)等信号通路;分子对接和分子动力学模拟结果提示,异川楝素和川楝素均可与mTOR形成相对稳定的复合物,其中mTOR-异川楝素复合物构象稳定性相对更优。结论:川楝子炮制减毒可能与异川楝素、川楝素等毒性相关差异成分含量降低有关,其潜在机制可能涉及炎症免疫、应激反应及脂质代谢相关通路调控,其中醋制处理的减毒趋势较盐制更明显。