BRD1通过调控ITGA2-AKT轴促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移OA

目的:探讨含溴结构域蛋白1(BRD1)通过调控PI3K/AKT信号通路影响非小细胞肺癌(NSCLC)进展的作用机制。方法:利用TIMER 3.0数据库评估BRD1作为免疫治疗标志物的预测价值。利用慢病毒体系构建稳定过表达BRD1及N端截短突变体BRD1-ΔN的人肺癌细胞A549和NCI-H1299。采用CCK-8实验、克隆形成实验、划痕愈合实验及Transwell实验检测过表达BRD1/BRD1-ΔN对细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡水平及凋亡相关蛋白的变化。RNA-seq筛选受BRD1/BRD1-ΔN影响的信号通路,Western blotting及体外激酶实验验证BRD1/BRD1-ΔN过表达对AKT磷酸化的调控作用。采用AKT抑制剂LY294002处理过表达BRD1/BRD1-ΔN的NCI-H1299细胞,结合功能实验(CCK-8实验、划痕愈合实验)明确过表达BRD1/BRD1-ΔN促进细胞的增殖和迁移是否依赖AKT活化。通过RNA-seq联合KEGG/GSEA分析、免疫共沉淀(Co-IP)、RT-qPCR,鉴定整合素α2(ITGA2)是促进AKT活化的关键分子;通过Co-IP、敲低ITGA2、Western blotting及功能实验明确ITGA2在BRD1调控AKT活化中的具体作用。结果:数据库分析显示,BRD1可作为NSCLC免疫治疗的中等预测标志物(AUC=0.625)。过表达BRD1/BRD1-ΔN显著增强了NSCLC细胞的增殖和迁移能力(P<0.01或P<0.001),但不影响细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达(均P>0.05);RNA-seq分析表明过表达BRD1/BRD1-ΔN主要富集于PI3K/AKT信号通路。Western blotting及体外激酶实验显示,BRD1/BRD1-ΔN过表达不影响AKT上游激酶(PDK1)的磷酸化,也不改变AKT的乙酰化修饰水平(均P>0.05);AKT抑制剂LY294002处理过表达BRD1/BRD1-ΔN细胞,发现BRD1/BRD1-ΔN促细胞增殖和迁移的作用部分依赖AKT的活化;RT-qPCR及Western blotting证实,BRD1过表达可上调ITGA2的mRNA和蛋白水平,敲低ITGA2则可逆转BRD1诱导的AKT激活及细胞增殖和迁移能力的增强。结论:BRD1是NSCLC的一种新型促癌因子,其通过上调ITGA2表达激活AKT信号通路,进而促进肺癌细胞的增殖和迁移。