麻疹-流行性腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗通过诱导免疫原性细胞死亡激活三阴性乳腺癌抗肿瘤免疫OA

目的:探讨麻疹-流行性腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗(MMR)通过诱导免疫原性细胞死亡(ICD)对三阴性乳腺癌(TNBC)的免疫调节机制。方法:体外实验采用CCK-8法检测MMR对TNBC细胞4T1和MDA-MB-231存活率的影响,免疫荧光法检测MDA-MB-231细胞中钙网蛋白(CALR)表达,磷钼酸比色法检测MDA-MB-231细胞内ATP的含量,ELISA检测细胞上清液中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平,通过GEPIA网站分析CALR和HMGB1对乳腺癌患者生存期的影响。体内实验中经皮下注射4T1-Luc细胞于雌性BALB/c小鼠乳腺脂肪垫构建TNBC小鼠模型。设Control组、盐酸阿霉素(Dox)组、MMR组,按照分组每两天静脉给药1次,连续给药3次。动物活体成像系统观察肿瘤体积变化;记录小鼠体质量及各器官指数初步评估疫苗安全性;H-E染色观察肿瘤病理变化;免疫组化和Western blotting检测肿瘤中CALR和HMGB1蛋白的表达。流式细胞术分析小鼠脾T淋巴细胞亚群及肿瘤树突状细胞和巨噬细胞比例;免疫组化检测肿瘤CD8+T淋巴细胞浸润;ELISA检测血清中促炎细胞因子IL-6和TNF-α含量。结果:MMR对4T1细胞的活性抑制作用较弱;MMR对MDA-MB-231细胞抑制率达90.39%(P<0.001)。与Control组相比,MMR组MDA-MB-231细胞中ICD相关蛋白(CALR、ATP、HMGB1)表达上调(P<0.001)。GEPIA网站分析表明,CALR和HMGB1高表达的患者总生存期有所延长。MMR延缓了荷瘤小鼠肿瘤体积增长(P<0.001),延长小鼠的生存期,且28 d内MMR组荷瘤小鼠体重与Control组无显著性差异(P>0.05);H-E染色显示,与Control组相比,MMR组小鼠肿瘤组织坏死区域扩大且有免疫细胞浸润;MMR上调肿瘤ICD相关蛋白CALR、HMGB1的表达水平;MMR组脾CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞及肿瘤树突状细胞和M1型巨噬细胞的比例增加(P<0.05),CD8+T淋巴细胞在肿瘤组织中的浸润增加(P<0.001),且促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平升高(P<0.01)。结论:MMR减毒活疫苗对TNBC的抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤发生ICD进而激活抗肿瘤免疫相关。