FAP-CTLA-4 CAR-T细胞联合阿帕替尼增强抗胶质母细胞瘤作用及机制研究OA

目的:构建了一种靶向成纤维细胞活化蛋白(FAP)且能分泌CTLA-4单链抗体(scFv)的CAR-T细胞,并探讨其联合血管靶向药物阿帕替尼对胶质母细胞瘤(GBM)的抗肿瘤效果及机制。方法:构建FAP-CTLA-4 CAR过表达载体,转导至T细胞中制备FAP-CTLA-4 CAR-T细胞。流式细胞术检测FAP-CTLA-4 CAR-T细胞表面分子CD69表达,ELISPOT检测其分泌IFN-γ的能力,细胞增殖实验分析FAP-CTLA-4 CAR-T细胞的增殖情况,杀伤实验分析其联合阿帕替尼处理对人脑星形胶质母细胞瘤U-87 MG细胞治疗效果的影响。建立小鼠U-87 MG细胞异种移植瘤模型。分别用FAP-CTLA-4 CAR-T细胞单独治疗或联合阿帕替尼治疗荷瘤小鼠,命名为FAP-CTLA-4 CAR-T组、阿帕替尼组和FAP-CTLA-4 CAR-T+阿帕替尼组,观察各组小鼠肿瘤生长情况,免疫组化、TUNEL染色与免疫荧光法检测各组肿瘤组织中Ki-67、CD31表达及细胞凋亡情况,流式细胞术分析FAPCTLA-4 CAR-T细胞在荷瘤小鼠体内的存活状况,H-E染色和血清生化分析评估联合治疗的安全性。结果:与FAP-CTLA-4CAR-T组、阿帕替尼组相比,FAP-CTLA-4 CAR-T+阿帕替尼组中CAR-T细胞的活化水平显著提高,细胞增殖能力明显增强,IFN-γ分泌细胞比例及对靶细胞的杀伤效率均提高(P<0.01或P<0.05)。在荷瘤小鼠模型中,联合治疗显著抑制肿瘤生长并延长小鼠生存时间(P<0.01或P<0.05),同时抑制肿瘤细胞增殖、降低微血管密度、促进肿瘤细胞凋亡,并延长CAR-T细胞在肿瘤组织中的存活时间(P<0.01或P<0.05),且未对主要组织器官造成毒性损伤。结论:FAP-CTLA-4 CAR-T细胞与阿帕替尼联合应用在GBM治疗中显示出协同增效作用与良好的安全性。