六味地黄丸通过Wnt/β-连环蛋白通路调控细胞交互促进腱骨愈合的机制OA

目的探讨六味地黄丸通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路调控骨髓间充质干细胞(BMSCs)与巨噬细胞交互作用促进腱骨愈合的机制。方法将BMSCs与巨噬细胞按1∶4的比例进行共培养,分为对照组、10%含药血清组、20%含药血清组、Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)组、20%含药血清+DKK-1组。细胞共培养48 h,成骨诱导14 d后,检测巨噬细胞中CD86、CD206阳性细胞率,BMSCs中钙结节阳性染色面积占比,细胞上清液中骨钙素(OCN)、抑瘤素M(OSM)水平和碱性磷酸酶(ALP)活性,细胞中OCN、Runt相关转录因子2(RUNX2)、OSM、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、β-catenin mRNA及蛋白表达水平。采用Pearson相关性分析考察LRP5、β-catenin蛋白表达分别与OCN、RUNX2、OSM蛋白表达及CD206阳性细胞率的相关性。结果与对照组比较,10%含药血清组和20%含药血清组的CD86阳性细胞率均显著降低,CD206阳性细胞率、钙结节阳性染色面积占比、OCN水平、OSM水平、ALP活性和OCN、RUNX2、OSM、LRP5、β-catenin mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与20%含药血清组比较,20%含药血清+DKK-1组上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。LRP5、β-catenin蛋白表达与OCN、RUNX2、OSM蛋白表达及CD206阳性细胞率均呈正相关。结论六味地黄丸可通过激活Wnt/β-catenin通路,诱导巨噬细胞向M2型极化并分泌OSM,促进BMSCs成骨分化与基质矿化,协同促进腱骨愈合。