山楂来源外泌体样纳米囊泡通过调控SOX9信号通路抑制AngⅡ和TGF-β诱导的心脏成纤维细胞活化OA

[目的]研究山楂来源外泌体样纳米囊泡(HDELN)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和转化生长因子β(TGF-β)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(RCF)活化的作用机制。[方法]体外提取并培养原代RCF,使用AngⅡ和TGF-β诱导RCF活化,通过CCK-8法测定细胞存活率,采用Western blot检测蛋白表达水平,采用RT-qPCR检测mRNA表达水平,利用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,利用siRNA转染RCF构建SRY盒转录因子9(SOX9)低表达细胞模型。[结果] CCK-8法检测结果显示,AngⅡ和TGF-β可显著提升RCF的细胞活力(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,AngⅡ和TGF-β可上调RCF中Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白α1(COL3A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨膜蛋白(Postn)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的mRNA表达水平(P<0.05)。Western blot结果显示,AngⅡ和TGF-β可上调RCF中COL1A1、COL3A1和α-SMA的蛋白表达水平(P<0.05)。细胞划痕实验结果表明,AngⅡ和TGF-β可显著提高RCF的迁移能力(P<0.05)。差速离心法和蔗糖梯度密度离心法提取HDELN。加入HDELN后,AngⅡ和TGF-β诱导的RCF活化现象被显著逆转(P<0.05)。Western blot和RT-qPCR结果显示,AngⅡ和TGF-β可上调RCF中SOX9的表达水平,而HDELN则下调其表达水平(P<0.05)。构建SOX9低表达细胞模型后,实验结果显示,低表达SOX9的RCF活化水平显著低于正常RCF(P<0.05)。[结论] HDELN可通过抑制SOX9信号通路,进而抑制由AngⅡ和TGF-β诱导的RCF活化。