基于网络药理学与实验验证探讨绵马贯众毒性物质基础及其作用机制OA

基于网络药理学探讨绵马贯众毒性成分及其作用机制,并进行实验验证。采用小鼠经口急性毒性试验考察绵马贯众药材不同提取部位的毒性,包括95%乙醇冷浸渗漉提取部位(95%ethanol cold soaked diacolation extract, EC)、95%乙醇加热回流提取部位(95%ethanol heated reflux extract, EH)、水煎煮提取部位(water decoction extract, WD);采用超高效液相色谱-串联电喷雾离子源质谱技术(ultra-high performance liquid chromatography-tandem electrospray ionization mass spectrometry, UPLC-ESI-MS/MS)解析绵马贯众药材提取物灌胃给药小鼠后的入血成分,研究其体内主要的代谢过程;网络药理学预测和筛选出绵马贯众产生毒性作用的关键成分、作用靶点和信号通路;通过分子对接和斑马鱼急性毒性试验进行验证。研究结果表明,EC组的小鼠半数致死量(median lethal dose, LD50)值为4.30 g/kg,具有毒性,而EH组、WD组的LD50值>20.00 g/kg,为无毒级别;血清中共检测到16个入血原型成分和代谢产物,多为间苯三酚类化合物;网络药理学分析发现绵马贯众产生毒性的关键化学成分为绵马酚B、1-甲基-3-丁酰基间苯三酚、黄绵马酸AB等,核心靶点为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2 gene,BCL-2)等,GO富集分析表明主要与磷酸化、对外源性刺激的反应、胶原蛋白分解代谢过程、节律过程等生物过程有关,KEGG富集分析表明主要与内分泌抵抗信号通路、癌症信号通路、脂质和动脉粥样硬化信号通路等信号通路有关;分子对接进一步验证了黄绵马酸AB、黄绵马酸PB等化学成分与EGFR、基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)等核心靶点具有较好的结合能力;斑马鱼急性毒性试验结果显示,黄绵马酸AB的半数致死浓度(median lethal concentration, LC50)值为2.93μg/mL,为高毒。综上,本研究初步探讨了绵马贯众药材毒性物质基础及潜在的作用机制,为绵马贯众临床用药的安全性提供参考。