cAMP信号通路介导的肉蔻五味丸抗失眠作用研究OA

目的:探讨肉蔻五味丸通过调控环磷酸腺苷(cAMP)信号通路对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠模型大鼠的作用及机制。方法:按照随机数表法,从48只雄性SD大鼠中随机抽取8只作为对照组,腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠溶液。其余40只大鼠腹腔注射PCPA 400 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续造模4 d,造模成功后再根据成模判定指标随机分为5组,分别为模型组,地西泮组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),肉蔻五味丸低、中、高剂量(0.4、0.8、1.6 g·kg^(-1)·d^(-1))组,每组各8只。治疗组灌胃对应药物,非治疗组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,连续给药7 d。采用戊巴比妥钠翻正实验评估大鼠的睡眠时间;采用旷场测试(OFT)评估大鼠自主活动行为;采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠海马中海马角1区(CA1)、CA3和齿状回(DG)的病理改变;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠血清和海马中5-羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)水平;采用网络药理学方法筛选肉蔻五味丸抗失眠的关键靶点及核心通路;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、ELISA、蛋白免疫印迹(WB)和免疫荧光(IF)法验证通路关键靶点。结果:肉蔻五味丸能增加PCPA致失眠大鼠睡眠持续时间、旷场运动总距离、举爪站立次数及平均速度,升高血清和海马中5-HT、GABA表达水平,并能减轻海马神经元损伤。网络药理学筛选的靶点主要富集于cAMP和肿瘤坏死因子(TNF)等通路,其中核心通路为cAMP通路,通路上的关键靶点有cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)、脑源性神经营养因子(BDNF)和丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt)等;实验验证肉蔻五味丸能上调海马中cAMP的表达水平,蛋白激酶A(PKA)、CREB mRNA的转录水平,磷酸化PKA(p-PKA)/PKA、pCREB/CREB的蛋白质相对表达量,以及BDNF的平均荧光强度和蛋白质相对表达量。结论:肉蔻五味丸能改善PCPA致失眠大鼠的睡眠时间和自主活动行为,减轻海马神经元的损伤,并增加GABA、5-HT和BDNF的表达水平,其机制可能由cAMP/PKA/CREB信号通路介导。