润目逍遥散对干眼肝经郁热证模型小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响OA

目的:以Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路为切入点,探讨润目逍遥散对干眼肝经郁热证模型小鼠的作用及其机制。方法:将66只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组及润目逍遥散高、中、低剂量组,每组11只。除正常组外,其余各组采用苯扎氯铵滴眼联合干燥环境与慢性应激建立干眼肝经郁热证小鼠模型。成模后连续干预14 d,润目逍遥散高、中、低剂量组分别给予29.7、14.85、7.43 g·kg^(-1)润目逍遥散灌胃,2次/d;玻璃酸钠组给予玻璃酸钠滴眼液5μL/眼,2次/d;正常组和模型组灌胃等体积去离子水。检测小鼠泪液分泌量、易激惹程度评分、角膜荧光染色及角膜、泪腺、睑板腺、肝组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法(IHC)检测角膜、泪腺组织IL-1β、TNF-α蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测角膜、泪腺及睑板腺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠泪液分泌量显著降低,易激惹程度评分显著升高,角膜荧光染色加重,角膜、泪腺、睑板腺及肝组织病理损伤明显,血清IL-1β、TNF-α水平显著升高,角膜及泪腺组织IL-1β、TNF-α蛋白表达及角膜、泪腺、睑板腺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,玻璃酸钠组及润目逍遥散各剂量组均可不同程度增加泪液分泌量、减轻角膜荧光染色及组织病理损伤、降低血清IL-1β和TNF-α水平,并下调角膜、泪腺组织IL-1β、TNF-α蛋白表达及角膜、泪腺、睑板腺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达,其中润目逍遥散高剂量组作用较明显,多项指标优于玻璃酸钠组(P<0.05,P<0.01)。结论:润目逍遥散可能通过下调干眼肝经郁热证模型小鼠角膜、泪腺及睑板腺中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的活性,抑制炎症反应,减轻眼表组织损伤,其作用具有一定剂量依赖性,以高剂量效果最为显著。