绞股蓝皂苷L调控NUF2影响镁稳态诱导卵巢癌细胞凋亡的分子机制OA

目的:探讨NDC80动粒复合体组成部分(NUF2)与镁稳态在卵巢癌细胞凋亡中的作用及绞股蓝皂苷L(Gyp-L)对NUF2与镁稳态的调控机制。方法:将卵巢癌OVCAR3细胞分为空白组、Gyp-L低浓度(50µmol·L^(-1))组、Gyp-L高浓度(100µmol·L^(-1))组和顺铂(15µmol·L^(-1))组。通过细胞划痕、克隆实验及原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色反映OVCAR3细胞迁移、增殖、凋亡能力。通过GEO数据库,筛选出卵巢癌差异表达基因;STRING数据库,了解差异表达基因蛋白互作关系;TIMER数据库,进行预后生存分析;GEPIA数据库,验证基因差异表达水平。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测OVCAR3细胞NUF2、镁稳态相关指标:镁转运蛋白1(MAGT1)、非印记Prader-Willi/Angelman综合征基因1(NIPA1)、NIPA样结构域包含蛋白1(NIPAL1)及凋亡相关指标B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平;Wes全自动蛋白表达分析系统检测OVCAR3细胞NUF2、MAGT1、NIPA1、NIPAL1、Bcl-2及Bax蛋白表达水平。构建过表达NUF2模型,并进行Gyp-L干预。通过细胞克隆、TUNEL染色、Real-time PCR、Wes全自动蛋白表达分析系统验证Gyp-L通过调控NUF2影响镁稳态诱导卵巢癌细胞凋亡的分子机制。最后,通过免疫荧光检测Mg2+含量及蛋白质合成效率。结果:Gyp-L能够明显抑制OVCAR3细胞迁移与增殖能力,明显促进其凋亡(P<0.05)。过表达NUF2明显提高MAGT1、NIPA1、NIPAL1、Bcl-2表达水平,明显降低Bax表达水平(P<0.05),使细胞内Mg2+含量及蛋白合成效率明显升高,同时抑制细胞凋亡(P<0.05)。Gyp-L能够逆转NUF2过表达所导致的镁稳态失衡及凋亡抑制,明显下调NUF2、MAGT1、NIPA1、NIPAL1、Bcl-2表达水平(P<0.05),同时明显上调Bax表达水平(P<0.05)。结论:Gyp-L能够抑制卵巢癌的发生,其机制可能与抑制NUF2表达以维持镁稳态,诱导卵巢癌细胞凋亡有关。