多模式识别结合HPLC指纹图谱及多指标成分定量测定的银翘散质量评价研究OA

目的:建立银翘散高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及多指标成分定量测定方法,并结合多种化学模式识别分析方法对不同批次银翘散样品的质量进行综合评价。方法:采用Kromasil 100-5-C_(18)色谱柱,以乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱;检测波长为275 nm;柱温为30℃;流速为1 mL/min,进样量为10μL。建立了24批银翘散的指纹图谱及芦丁、绿原酸、牛蒡苷等13种成分的含量测定方法,并进行方法学考察。进一步结合相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等化学模式识别分析方法对不同批次银翘散样品的质量进行评价。结果:建立的高效液相色谱法线性关系良好(R2≥0.9999),方法学考察各项符合检测分析要求。24批样品的指纹图谱共标定9个共有峰,通过对照品比对,其中9个共有峰被指认为相应化学成分,分别为绿原酸、牛蒡苷、连翘酯苷A、甘草苷、橙皮苷、甘草酸、牛蒡苷元、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸。24批银翘散样品指纹图谱的相似度在0.854~0.982之间;CA分析将24批样品分为3类,分类结果与生产厂家和剂型均有一定相关性,但并非完全按剂型区分;PCA分析提取了2个主成分;OPLS-DA分析表明,4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、牛蒡苷、牛蒡苷元及甘草酸的含量差异是区分不同剂型银翘散样品的主要化学基础,而染料木素则因其在多数样品中未被检出(即呈“有无”分布模式),成为辅助的差异标志物。结论:本研究建立了24批银翘散样品的HPLC指纹图谱及13种指标成分的含量测定方法,并结合化学模式识别分析方法用于对不同批次样品的质量评价,可为银翘散质量的综合评价提供参考。