优化表达谷氨酸脱羧酶高效制备γ-氨基丁酸OA

谷氨酸脱羧酶(GAD)可催化L-谷氨酸(L-Glu)脱羧生成GABA。为获得GAD高产菌株,克隆了Lactobacillus brevis NM-2的gadB基因并进行密码子优化,以pET-30a(+)为表达载体,构建了重组菌株E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-gadB°。SDS-PAGE电泳及酶活力测定结果表明,经IPTG诱导,该菌株成功实现GAD的可溶性表达。在0.05 mmol/L磷酸吡哆醛、加酶量10 U/g底物、pH 4.6、40℃最优催化条件下反应13 h,该酶可将600 g/L L-Glu转化为GABA,转化率达99.6%,生产效率为32.2 g/(L·h)。