毛蕊花糖苷对帕金森病小鼠多巴胺细胞保护作用的蛋白组学研究OA

目的 探索毛蕊花糖苷(Verbascoside,VB)对帕金森病(Parkinson''s disease,PD)小鼠多巴胺细胞保护作用的机制。方法 纳入63只C57/BL雄性小鼠为实验对象,随机分为空白对照组、MPTP组、10 mg/kg组、30 mg/kg组、60 mg/kg组、120 mg/kg组、180 mg/kg组,每组9只。造模成功后采用矿场、爬杆、悬挂实验评估小鼠行为学改变。采用苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)、尼氏染色评估小鼠黑质区神经元计数。采用免疫组化和免疫荧光染色分别评估黑质区TH阳性、阳性细胞计数。采用Western blotting检测小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)蛋白的表达情况。采用HE染色评估肝脏和肾脏细胞形态和细胞计数。最后筛选的最佳剂量组黑质组织进行蛋白组学分析。结果(1)矿场实验中,120 mg/kg组总路程和中央区的路程均高于MPTP组和其他各浓度梯度组(均P<0.05);爬杆实验中,120 mg/kg组爬杆时间均低于MPTP组和其他各浓度梯度组(均P<0.05);悬挂实验中,120 mg/kg组悬挂评分均高于MPTP组和10 mg/kg组(均P<0.05)。(2) HE染色、尼氏染色和免疫组化中,120 mg/kg组细胞计数、棕褐色像素占比均高于MPTP组和其他各浓度梯度组(均P<0.05)。(3)免疫荧光中,120 mg/kg组平均荧光强度均高于MPTP组和其他各浓度梯度组(均P<0.05)。(5) Western blotting中,TH在120 mg/kg组小鼠中的相对表达量均高于MPTP组和其他各浓度梯度组(均P<0.05)。(6)蛋白组学分析显示120 mg/kg组和MPTP组比较,具有统计学差异的蛋白质合计181个,其中上调蛋白83个,下调蛋白98个;亚细胞定位于细胞核的差异蛋白最多有85个,且基因本体(Gene Ontology,GO)功能分析显示最多有6个与免疫直接相关的生物过程(Biological Process,BP);KEGG通路分析显示与精氨酸生物合成的富集度水平最高(均P<0.05)。结论 120 mg/kg的VB对PD小鼠的DA神经元具有保护作用,且该保护作用可能与包括精氨酸生物合成在内的多种生物过程有关。