长链非编码RNA-TNFRSF13C靶向调控改善牙周炎模型大鼠牙周病理形态OA

背景:研究发现,长链非编码RNA(lncRNA)在牙周炎发病中起关键调控作用。缺氧诱导因子1α与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)构成的信号轴,在炎症调控中意义重大,其与lncRNA-TNFRSF13C的关联成为当前该领域研究的关键切入点。目的:探究lncRNA-TNFRSF13C靶向缺氧诱导因子1α-PPARγ信号轴对牙周炎的作用机制。方法:(1)取牙周膜细胞将其分为牙周膜细胞组、脂多糖+牙周膜细胞组、脂多糖+牙周膜细胞+lncRNA-TNFRSF13C-NC(lncRNA-TNFRSF13CNC)组、脂多糖+牙周膜细胞+lncRNA-TNFRSF13Csno(lncRNA-TNFRSF13Csno)组、脂多糖+牙周膜细胞+lncRNA-TNFRSF13CsiRNA(lncRNATNFRSF13C siRNA)组,RT-PCR法检测细胞lncRNA-TNFRSF13C及缺氧诱导因子1α、PPARγ表达,MTT法检测细胞增殖,DAPI法检测细胞凋亡,免疫印迹检测缺氧诱导因子1α、PPARγ蛋白表达,双荧光素酶报告实验设计并克隆lncRNA-TNFRSF13C的完整序列及其突变体,证实lncRNATNFRSF13C和缺氧诱导因子1α-PPARγ信号轴的相互作用;(2)取30只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组,模型组,lncRNA-TNFRSF13C siRNA组,每组10只,对后2组大鼠采用牙周注射牙龈卟啉单胞菌法建立牙周炎模型,建模成功后lncRNA-TNFRSF13C siRNA组大鼠尾静脉注射lncRNA-TNFRSF13C siRNA 40 mg/kg,苏木精-伊红染色检测各组大鼠牙周组织病理形态。结果与结论:(1)与牙周膜细胞组相比,脂多糖+牙周膜细胞组lncRNA-TNFRSF13C、缺氧诱导因子1αmRNA表达升高(P<0.05),PPARγmRNA表达降低(P<0.05),与脂多糖+牙周膜细胞组相比,lncRNA-TNFRSF13C-NC组lncRNA-TNFRSF13C及缺氧诱导因子1α、PPARγmRNA表达无明显差异(P>0.05),lncRNA-TNFRSF13C sno组lncRNA-TNFRSF13C及缺氧诱导因子1αmRNA表达升高(P<0.05),PPARγmRNA表达降低(P<0.05),与lncRNA-TNFRSF13C sno组相比,lncRNA-TNFRSF13C siRNA组lncRNA-TNFRSF13C及缺氧诱导因子1αmRNA表达降低(P<0.05),PPARγmRNA表达升高(P<0.05);(2)与牙周膜细胞组相比,脂多糖+牙周膜细胞组细胞增殖降低(P<0.05)、细胞凋亡升高(P<0.05),与脂多糖+牙周膜细胞组相比,lncRNA-TNFRSF13C-NC组细胞增殖无明显差异(P>0.05),lncRNA-TNFRSF13C sno组细胞增殖降低(P<0.05)、细胞凋亡升高(P<0.05),与lncRNA-TNFRSF13C sno组相比,lncRNA-TNFRSF13C siRNA组细胞增殖升高(P<0.05)、细胞凋亡降低(P<0.05);(3)与牙周膜细胞组相比,脂多糖+牙周膜细胞组缺氧诱导因子1α蛋白表达升高(P<0.05)、PPARγ蛋白表达降低(P<0.05),与脂多糖+牙周膜细胞组相比,lncRNATNFRSF13C-NC组缺氧诱导因子1α、PPARγ蛋白表达无明显差异(P>0.05),lncRNA-TNFRSF13C sno组缺氧诱导因子1α蛋白表达升高(P<0.05)、PPARγ蛋白表达降低(P<0.05),与lncRNA-TNFRSF13C sno组相比,lncRNA-TNFRSF13C siRNA组缺氧诱导因子1α蛋白表达降低(P<0.05)、PPARγ蛋白表达升高(P<0.05);(4)双荧光素酶报告结果显示,转染lncRNA-TNFRSF13C后可显著升高HIF1α-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),降低PPARγ-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05);(5)模型组大鼠牙周组织充血、水肿且有大量炎性细胞浸润,牙周膜纤维紊乱、断裂,可见上皮增生或溃疡,与模型组比较,lncRNA-TNFRSF13C siRNA组大鼠病理结构明显改善。结论:抑制lncRNA-TNFRSF13C可有效调控脂多糖诱导的牙周膜细胞活性,并改善牙周炎大鼠牙周组织病理形态,其作用机制可能与靶向调控缺氧诱导因子1α-PPARγ信号轴有关。