基于网络药理学探讨解毒消癥饮治疗结直肠癌的作用机制OA

目的 基于网络药理学(NP)研究解毒消癥饮治疗结直肠癌(CRC)的作用机制,并进行实验验证.方法 利用TCMSP和TCMID数据库筛选解毒消癥饮活性成分;利用SwissTargetPrediction数据库对解毒消癥饮活性成分作用靶点进行预测,利用GeneCards数据库筛选CRC相关靶点,将活性成分作用靶点与疾病靶点取交集,筛选解毒消癥饮治疗CRC的潜在作用靶点;利用Cytoscape 3.10.3软件绘制中药-活性成分-交集靶点网络图,筛选核心活性成分;利用STRING数据库构建交集靶点的蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点;将交集靶点导入Metascape数据库进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.实验验证解毒消癥饮治疗CRC的作用机制.制备解毒消癥饮乙酸乙酯提取物(EE-JXY);以人结肠癌HCT-8细胞为研究对象,设立对照组及EE-JXY低(0.05 mg/mL)、中(0.1 mg/mL)、高(0.2 mg/mL)剂量组.采用倒置显微镜(40倍)观察EE-JXY对HCT-8细胞形态学的影响;采用CCK8法检测HCT-8细胞增殖活力;采用Western blot检测HCT-8细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白[磷酸化(p)-磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、PI3K、p-蛋白激酶B(Akt)、Akt]表达水平.结果 NP筛选获得解毒消癥饮活性成分46个,活性成分作用靶点742个,疾病靶点1 788个,解毒消癥饮治疗CRC的潜在作用靶点245个;中药-活性成分-交集靶点网络包含木犀草素、槲皮素、山柰酚等18个核心活性成分;PPI网络显示Akt1、肿瘤坏死因子(TNF)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)等20个核心靶点;GO功能分析获得2 704条显著富集条目,其中,生物学过程(BP)、细胞组分(CC)及分子功能(MF)分别包含2 285、127和292条;KEGG信号通路富集分析获得213条通路,主要涉及PI3K-Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路.实验验证表明,与对照组比较,EE-JXY低、中、高剂量组HCT-8细胞密度呈剂量依赖性下降,细胞间紧密连接遭到破坏,体积皱缩、变圆,并呈现不同程度脱落,细胞相对增殖活力均降低(P＜0.05),p-PI3K和p-Akt蛋白表达量均下降(P＜0.05),p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值均下降(P＜0.05),EE-JXY高剂量组PI3K蛋白表达量下降(P＜0.05).结论 解毒消癥饮能显著抑制CRC细胞增殖并诱导其发生形态学改变,其机制可能与复方中木犀草素、槲皮素等多种活性成分协同靶向抑制PI3K-Akt信号通路有关.