六味抗癌方调控AMPK/mTOR信号通路对结肠癌细胞增殖和自噬的影响OA

目的 探究六味抗癌方(LKR)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对结肠癌(CC)细胞增殖和自噬的影响.方法 常规培养CT26细胞,采用随机数字表法,按干预方式将小鼠CC细胞CT26分为对照组(含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基)、5-氟尿嘧啶(5-FU)组(1 μmol/L)和LKR低、中、高剂量组(0.5、0.75、1 mg/mL),持续干预24 h.采用CCK-8法检测细胞活力,平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法和透射电子显微镜观察细胞自噬水平及细胞自噬超微结构变化,采用Western blot检测细胞内增殖相关蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)]、自噬相关蛋白[Bcl-2相互作用蛋白1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、泛素结合蛋白(p62)]及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,LKR中、高剂量组细胞活力均降低(P<0.05),细胞克隆球形成数目均减少(P＜0.05),自噬荧光强度均增强(P＜0.05),透射电子显微镜下自噬小体、自噬溶酶体增多,LC3Ⅱ和Beclin-1蛋白表达水平、磷酸化(p)-AMPK/AMPK比值均增高(P＜0.05),p62和PCNA蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P＜0.05);与5-FU组比较,LKR高剂量组细胞活力降低(P＜0.05),细胞克隆球形成数目减少(P＜0.05),自噬荧光强度增强(P＜0.05),电子显微镜下自噬小体、自噬溶酶体增多,LC3Ⅱ蛋白表达水平增高(P＜0.05),PCNA蛋白表达水平降低(P＜0.05);与LKR低剂量组比较,LKR中、高剂量组细胞活力降低(P＜0.05),细胞克隆球形成数目减少(P＜0.05),自噬荧光强度增强(P＜0.05),LC3Ⅱ蛋白表达水平、p-AMPK/AMPK比值均增高(P＜0.05),p-mTOR/mTOR比值均降低(P＜0.05),高剂量组p62、PCNA蛋白表达水平降低(P＜0.05);与LKR中剂量组比较,LKR高剂量组细胞活力降低(P＜0.05),细胞克隆球形成数目减少(P＜0.05),自噬荧光强度增强(P＜0.05),电子显微镜下自噬小体、自噬溶酶体增多,LC3Ⅱ蛋白表达水平增高(P＜0.05),PCNA蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P＜0.05).结论 LKR可通过激活AMPK/mTOR信号通路诱导CC细胞自噬和抑制细胞增殖来发挥抗CC的作用.