隐丹参酮通过JAK2/STAT3轴调控巨噬细胞极化改善大鼠痛风性关节炎OA

探讨隐丹参酮(cryptotanshinone,CTS)通过Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)轴调控巨噬细胞极化对大鼠痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)的影响。大鼠随机分为对照组、GA组、CTS组(30 mg/kg)、JAK2激活剂香豆霉素A1(coumermycin A1,C-A1)组(5 mg/kg)、CTS+C-A1组(30 mg/kg CTS+5 mg/kg C-A1),每组12只。除对照组外,其他各组采用尿酸钠(monosodium urate,MSU)晶体注射踝关节建立GA大鼠模型。末次给药后,观察各组大鼠踝关节肿胀程度;HE染色观察大鼠踝关节滑膜组织病理变化并进行评分;ELISA试剂盒检测大鼠血清白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6、IL-10水平;流式细胞术检测大鼠踝关节滑膜组织中M1型(CD86^(+))和M2型(CD206^(+))巨噬细胞比例;RT-qPCR检测大鼠踝关节滑膜组织M1型极化标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、IL-1β和M2型极化标志物精氨酸酶-1(arginase-1,ARG-1)、IL-10 mRNA表达量;Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达量。从大鼠股骨和胫骨中分离培养巨噬细胞,CCK-8法检测细胞活力并筛选CTS的最适浓度。将巨噬细胞随机分为对照组、MSU组、CTS组,每组3个重复。除对照组外,其他各组使用MSU晶体刺激巨噬细胞建立炎症模型。RT-qPCR检测各组细胞M1和M2型极化标志物表达量。结果显示,与GA组相比,CTS干预可降低GA大鼠的关节肿胀度和组织学评分,减少血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平,下调滑膜组织中CD86^(+)M1型巨噬细胞比例、iNOS、IL-1βmRNA表达量以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达(P<0.05),增加血清IL-10水平,上调滑膜组织CD206^(+)M2型巨噬细胞比例以及ARG-1、IL-10 mRNA表达量(P<0.05)。回复实验结果显示,CTS部分逆转了C-A1的上述作用。体外实验结果显示,与MSU组相比,CTS组iNOS、IL-1βmRNA表达量降低(P<0.05),ARG-1、IL-10 mRNA表达量升高(P<0.05)。综上所述,CTS可通过抑制JAK2/STAT3轴促进大鼠巨噬细胞向M2型极化,减轻GA大鼠关节炎症。