香茅醛通过激活自噬-溶酶体途径促进RNF4降解以拮抗内皮细胞氧化损伤OA

[目的]探讨香茅醛是否通过增强自噬-溶酶体途径,促进环指蛋白4(RNF4)降解,进而稳定鸟苷三磷酸环化水解酶1(GTPCH1)的蛋白水平,以拮抗氧化应激诱导的人脐静脉内皮细胞损伤。[方法]采用H_(2)O_(2)处理人脐静脉内皮细胞构建氧化损伤模型,并用0.48 mmol/L香茅醛进行干预。MTT测定细胞活力,Western blot检测p62、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、GTPCH1和RNF4蛋白表达。使用溶酶体抑制剂氯喹(CQ)和蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞。免疫共沉淀(CoIP)验证在H_(2)O_(2)作用下GTPCH1的SUMO化及其与RNF4的相互作用。[结果]与对照组相比,H_(2)O_(2)处理可显著降低内皮细胞活力(P<0.05)及GTPCH1蛋白水平(P<0.01),并上调RNF4蛋白表达(P<0.01);CoIP实验证实,H_(2)O_(2)可诱导GTPCH1发生SUMO化修饰并与RNF4结合。与H_(2)O_(2)组相比,香茅醛干预可显著逆转上述变化,同时改善自噬流功能:p62水平显著降低(P<0.001),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值恢复正常(P<0.001),LAMP1表达上调(P<0.05)。抑制剂实验显示,与H_(2)O_(2)组相比,MG132可显著阻断GTPCH1的降解(P<0.01),CQ可显著抑制RNF4的降解(P<0.05)。[结论]H_(2)O_(2)通过诱导RNF4介导的GTPCH1 SUMO化-泛素化降解引发内皮细胞损伤;香茅醛通过增强自噬-溶酶体通路功能促进RNF4降解,进而稳定GTPCH1,拮抗H_(2)O_(2)所致的内皮细胞损伤。