基于“细菌超载”证据的增生性瘢痕治疗新方式探索OA

目的·观察体外细菌对成纤维细胞功能的影响,以及体内细菌干预对兔耳增生性瘢痕的影响。方法·收集2023年1月——2024年12月上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤整形与创面修复科的16例临床增生性瘢痕标本和正常皮肤组织,进行革兰染色。标准金黄色葡萄球菌扩增灭活后,以10^(2)、10^(3)和10^(4) CFU/mL干预正常皮肤来源的成纤维细胞。采用Edu染色观察金黄色葡萄球菌对成纤维细胞增殖的影响,免疫荧光染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达,Western blotting检测血管内皮生长因子(vascular permeability factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原蛋白表达,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测金黄色葡萄球菌对白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)等炎症因子分泌的影响。选取10只新西兰白兔,双耳共建立80个创面,创面采用金黄色葡萄球菌菌液处理,待增生性瘢痕形成后,予瘢痕皮内注射左氧氟沙星或生理盐水,观察瘢痕生长情况并进行温哥华瘢痕量表评分。兔耳瘢痕取材后,进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色和革兰染色,采用免疫组织化学检测IL-6、IL-8、TNF-α及MCP-1等炎症因子的表达。结果·临床瘢痕组织内存在大量革兰染色阳性菌,与正常皮肤比较差异有统计学意义(P=0.001)。体外实验证明:低丰度细菌(10^(2)、10^(3) CFU/mL)可显著促进成纤维细胞增殖(P=0.045,P=0.017)和α-SMA表达(P=0.042,P=0.002),促进VEGF(P=0.023,P=0.011)、TGF-β1(P=0.029,P=0.031)、Ⅰ型胶原蛋白(P=0.032,P=0.025)、Ⅲ型胶原蛋白表达(P=0.019,P=0.027),以及促进炎症因子IL-6(P=0.023,P=0.011)、IL-8(P=0.021,P=0.009)、TNF-α(P=0.029,P=0.011)及MCP-1(P=0.023,P=0.008)分泌。兔耳瘢痕中注射左氧氟沙星后,45 d和60 d时瘢痕增生减轻(P=0.019,P=0.013);60 d时瘢痕炎症细胞减少,细菌含量降低,胶原蛋白沉积变少,炎症因子IL-6(P=0.025)、IL-8(P=0.021)、MCP-1(P=0.028)及TNF-α(P=0.019)等表达下降。结论·低丰度细菌促进瘢痕成纤维细胞致纤维化能力,抗生素应用可有效减轻增生性瘢痕的形成。