利用猪源单B细胞中和抗体解析A型口蹄疫病毒AF72疫苗毒株抗原位点4的关键氨基酸OA
Mapping critical epitope residues of antigenic site 4 on the AF72 vaccine strain of foot-and-mouth disease virus serotype A using porcine single B-cell neutralizing antibodies
利用猪源单B细胞中和抗体,解析A型口蹄疫病毒(FMDV)AF72疫苗毒株的抗原结构特征.从猪源单B细胞抗体库中筛选12对天然配对的重链与轻链序列并构建抗体表达质粒,转染HEK-293F细胞进行表达.通过间接ELISA、间接免疫荧光试验和病毒中和试验验证抗体反应性和中和活性,筛选中和抗体逃逸突变株,反向遗传拯救单点突变毒株验证抗原表位的关键氨基酸位点.结果显示,12株抗体中有11株为A型FMDV特异性抗体,其中6株为AF72特异性中和抗体.PAF26、PAF27、PAF31和PAF32株的关键识别位点均为VP3 A68;PAF42株的关键识别位点为VP3 G70;PAF44株的关键识别位点为VP3 E139,这些残基在病毒衣壳表面的空间位置相邻.本研究鉴定了AF72疫苗毒株抗原位点4的关键氨基酸,为A型FMDV疫苗改造设计提供了支撑.
The antigenic structure of the AF72 vaccine strain of serotype A foot-and-mouth disease virus(FMDV)was characterized by neutralizing monoclonal antibodies(mAbs)derived from porcine single B cells.Twelve naturally paired immunoglobulin heavy-and light-chain sequences were identified and cloned into expression vectors,and recombinant antibodies were produced in HEK-293F cells.The reactivity and neutralizing activity of these mAbs were validated by indirect ELISA,indirect immunofluorescence assay,and virus neutralization tests.Furthermore,key amino acid residues of the antigenic epitopes were identified by screening escape mutants and confirmed using reverse genetics to rescue single-point mutant viruses.The results indicated that 11 of the 12 mAbs were specific to FMDV serotype A,among which six exhibited neutralizing activity against the AF72 strain.Specifically,residues VP3 A68(targeted by PAF26,PAF27,PAF31,and PAF32),VP3 G70(targeted by PAF42),and VP3 E139(targeted by PAF44)were identi-fied as critical recognition sites.These residues formed a spatially clustered region on the capsid surface,constituting the core epitope of antigenic site 4.This study refines the antigenic structural characteristics of the AF72 strain and supports the rational design of serotype A FMDV vaccines.
杨佳欣;孙普;付元芳;李坤;卢曾军;李凤娟;黄书伦;李平花;朱晓沛;张贺贺;李娇阳;曹轶梅;包慧芳
中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046
农业科技
口蹄疫病毒血清型AAF72疫苗毒株猪源单B细胞中和抗体中和抗原位点
foot-and-mouth disease virusserotype AAF72 vaccine strainporcine single B-cell neutralizing antibodyneutralizing antigenic site
《中国兽医科学》 2026 (5)
569-577,9
"十四五"国家重点研发计划项目(2021YFD1800304)国家自然科学基金面上项目(32373028)
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