采用KASP技术进行RhD阳性患者RHCE基因分型的临床应用研究OA
Clinical application of KASP-based RHCE genotyping in RhD-positive patients
目的 建立基于竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应(KASP)的 RHCE 基因分型方法并评估其用于临床检测的准确性.方法 设计基于KASP 技术的RHCE 基因分型引物,对成都地区1 194 例RhD 阳性住院患者进行基于 RHCE 基因第 2 内含子 109 bp 插入缺失、c.307T>C 及 c.676C>G 位点的 RHCE 基因分型,同时采用试管法对RHCE 血型进行血清学检测.将两种方法检测结果进行比对,10 例不一致标本分别复核血清学、KASP 结果并测序验证.另从中选取 377 例增加 c.48C>G 位点检测,比较不同位点及联合检测 RhC 抗原的准确性.结果 在 1 194例 RhD 阳性住院患者中,c.676 位点检测 RhE/Rhe 和 c.307 位点检测 Rhc 与血清学结果的一致率均为 100.0%,以109 bp 插入判断 RhC 的准确率为 99.7%,3 例不符标本经复核血清学及 Sanger 测序证明第 2 内含子因 109 bp 缺失而导致基因分型假阴性.以 c.48C 等位基因检测 RhC 存在7 例假阳性,准确率为98.1%(370/377);以109 bp 插入与 c.48C 等位基因联合判定 RhC 抗原,排除两位点结果不一致的 10 例后,367 例标本准确率达 100%.1 194 例患者的 RhCE 表型以 CCee(45.8%)和 CcEe(31.7%)为主,e 抗原阳性率最高为92.2%,Ce 单体型频率最高为66.9%.结论 基于KASP 技术的RHCE 基因分型方法具有高准确性,109 bp 插入缺失与c.48C 等位基因联合检测可进一步提升检测 RhC 抗原的准确性.该方法应用于成都地区 1 194 例 RhD 阳性住院患者的 RhCE 基因分型,获得了本地区 RhCE 表型及单体型分布数据,为制定本地区 RhCE 抗原匹配输血策略提供了参考.
Objective To develop a RHCE genotyping assay based on kompetitive allele-specific PCR(KASP)and as-sess its clinical accuracy for RhCE blood group determination.Methods KASP primers were designed to interrogate three RHCE loci:the 109 bp insertion/deletion in intron 2,c.307T>C,and c.676C>G.A total of 1 194 RhD-positive inpatients from Chengdu were typed by both KASP genotyping and manual tube serology.Discordant samples(n=10)were retested by both methods and further resolved by Sanger sequencing.An additional 377 cases were tested for the c.48C>G locus to eval-uate the predictive accuracy of individual loci and combined locus testing for RhC antigen.Results Genotyping concord-ance with serology was 100.0%for both the c.676C>G locus(RhE/Rhe)and the c.307T>C locus(Rhc).For RhC predic-tion using the 109 bp insertion,overall accuracy was 99.7%(1 191/1 194);the 3 discordant cases were confirmed by San-ger sequencing to be false negatives attributable to 109 bp deletion in intron 2.Testing the c.48C>G allele for RhC predic-tion yielded 7 false positives,with an accuracy of 98.1%(370/377).RhC antigen status was determined by combining the 109 bp insertion and the c.48C allele.After excluding 10 samples with inconsistent results between the two loci,the accu-racy reached 100%in the remaining 367 samples.When both loci were applied in combination,accuracy reached 100%in the 367 cases with concordant results.Among the 1 194 patients,CCee(45.8%)and CcEe(31.7%)were the most com-mon RhCE phenotypes.The e antigen had the highest positivity rate(92.2%),and the Ce haplotype was the most frequent(66.9%).Conclusion The KASP-based RHCE genotyping method achieves high accuracy for clinical RhCE typing.Combining the 109 bp insertion/deletion with the c.48C allele significantly improves RhC antigen prediction compared with either locus alone.This method was applied to RhCE genotyping of 1 194 RhD-positive inpatients in Chengdu,providing lo-cal RhCE phenotype and haplotype distribution data to support RhCE-matched transfusion practice.
连晓玉;徐海霞;王珏;李玲;刘忠;李梦丹;官笑羽;田力;王陈赢;吴迪;罗天琼;杜晓林;纪欣
中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052西南交通大学医学院,成都市第三人民医院(西南交通大学附属医院)输血科,四川 成都 610031中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052西南交通大学医学院,成都市第三人民医院(西南交通大学附属医院)输血科,四川 成都 610031西南交通大学医学院,成都市第三人民医院(西南交通大学附属医院)输血科,四川 成都 610031中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052西南交通大学医学院,成都市第三人民医院(西南交通大学附属医院)输血科,四川 成都 610031西南交通大学医学院,成都市第三人民医院(西南交通大学附属医院)输血科,四川 成都 610031中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052中国医学科学院 北京协和医学院 输血研究所,四川 成都 610052||中国医学科学院输血不良反应研究重点实验室,四川 成都 610052
医药卫生
RHCE基因分型竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应血型抗原
RHCEgenotypingkompetitive allele-specific PCRblood group antigens
《中国输血杂志》 2026 (5)
596-602,7
成都市科技局重点研发支撑计划成果转化示范项目(2024-YF09-00052-SN)中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-060)
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