基于网络药理学和细胞实验验证加味开心散治疗抑郁症的作用机制OA

目的 利用网络药理学方法和细胞实验探讨加味开心散治疗抑郁症的潜在药效物质和相关作用机制.方法 (1)借助 HERB、SwissADME 等平台检索并筛选加味开心散的活性组分及作用靶点,并通过 UniProt 数据库将靶点基因标准化.收集抑郁症的相关疾病靶点并构建韦恩图,绘制核心靶点蛋白网络,并建立"中药活性成分—共同靶点—疾病"的相互作用网络.运用 DAVID 数据库对共同基因进行 GO 功能与 KEGG 通路富集分析.通过 AutoDock 1.5.7 与 PyMol 进行关键活性成分与治疗靶点的分子对接验证.(2)采用脂多糖诱导BV2 细胞建立炎症细胞模型,将处于对数生长期的BV2 细胞分为对照组、模型组及加味开心散水提物低(1 μg·mL-1)、高(5 μg·mL-1)剂量组,醇提物低(1 μg·mL-1)、高(5 μg·mL-1)剂量组.借助 CCK-8 实验测定加味开心散对 BV2 细胞活力的影响,利用实时荧光定量PCR 和蛋白质印迹法分别检测 BV2 细胞中相关基因 mRNA 及蛋白的表达水平.结果 (1)筛选得到加味开心散有效成分217 个,加味开心散与抑郁症交集靶点 388 个.GO 功能富集条目 2 036 个,KEGG 通路富集分析得到192 条信号通路对疾病有治疗作用,主要涉及钙信号通路、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路等.分子对接结果表明,加味开心散关键活性成分蝙蝠葛碱、卡维丁和白兰花碱与核心靶点 TNF 的结合活性良好.(2)细胞实验结果显示,加味开心散水提物和醇提物均可抑制BV2 细胞增殖,能显著降低白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的 mRNA 水平,升高 cAMP、蛋白激酶 A(protein kinase A,PKA)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白表达,降低 p65 蛋白表达.结论 加味开心散可通过调节IL-1、TNF 和IL-6 等关键靶点抑制炎症因子的表达,并通过调节钙、cAMP、核因子κB 等信号通路来改善抑郁症症状.